(仪器分析课件）10.4 高效液相色谱法的分类教学讲义.pptVIP

仪器分析教程 第10章 高效液相色谱法 10.4 高效液相色谱法的分类 High Performance Liquid Chromatography （HPLC) 10.4.1 液-液分配色谱法 10.4.2 液-固色谱法 10.4.3 离子交换色谱法 10.4.4 空间排阻色谱法 10.4 高效液相色谱法的分类 根据分离机理不同，高效液相色谱法分为液—液分配色谱法、液—固吸附色谱法、离子交换色谱法、离子对色谱法、离子色谱法和空间排阻色谱法等。 10.4.1 液—液分配色谱法 （Liquid—liquid partition chromatography） 固定相与流动相均为液体（互不相溶）。 1.基本原理 组分在固定相和流动相上的分配，分离顺序取决于分配系数的大小，分配系数K（或分配比k）大的组分，保留值大，后出柱。 10.4 高效液相色谱法的分类 10.4.1 液—液分配色谱法 （Liquid—liquid partition chromatography） （1）正相液—液色谱法 固定液极性大于流动相极性的色谱法。 应用：分离极性较强的化合物，如脂肪酸、甾醇类 、 类脂化合物 磷脂类化合物等有机物。 根据固定液和流动相的极性不同： （2）反相液—液色谱法 固定液极性小于流动相极性的色谱法。 应用：是目前应用的最多最有效的液相色谱法。适合于分离芳烃、 稠环芳烃及烷烃等非极性或弱极性化合物。 10.4 高效液相色谱法的分类 10.4.1 液—液分配色谱法 （Liquid—liquid partition chromatography） 2.液—液分配色谱固定相 早期为在全多孔型担体或表面多孔性担体上涂渍固定液，固定液流失，较少采用。 现多采用化学键合固定相：（将各种不同基团通过化学反应键合到硅胶（担体）表面的游离羟基上。如：硅氧硅碳键型：≡Si—O—Si — C、硅氧碳键型：≡Si—O—C 等。 10.4 高效液相色谱法的分类 10.4.1 液—液分配色谱法 2.液—液分配色谱固定相 （1）传质快； （2）寿命长，稳定性好； （4）选择性好，可键合不同官能团； （5）有利于梯度洗脱。 化学键合固定相的特点： 10.4 高效液相色谱法的分类 10.4.2 液—固吸附色谱法 （Liquid-solid adsorption chromatography ） 1.分离原理 组分在固定相吸附剂上的吸附与解吸；利用吸附剂对溶剂和各组分分子的吸附能力不同得以分离。 2.固定相 为固体吸附剂，极性：如硅胶、氧化铝等，非极性：活性炭等。较常使用的是5～10μm的硅胶吸附剂； 10.4 高效液相色谱法的分类 10.4.2 液—固吸附色谱法 （Liquid-solid adsorption chromatography ） 3.流动相 各种不同极性的一元溶剂或按一定比例混合的多元溶剂。 4.应用 不同类型的有机化合物及 几何异构体的分离分析。 如，有机氯农药的分析。 10.4 高效液相色谱法的分类 10.4.3 离子交换色谱法 （Ion-exchange chromatography ） 1.分离原理 组分在固定相上发生的反复离子交换反应；组分与离子交换剂之间亲和力的大小与离子半径、电荷、存在形式等有关。亲和力大，保留时间长。 阴离子交换： 阳离子交换： 10.4 高效液相色谱法的分类 10.4.3 离子交换色谱法 （Ion-exchange chromatography ） 2.固定相 阴离子离子交换树脂或阳离子离子交换树脂。 10.4 高效液相色谱法的分类 10.4.3 离子交换色谱法 （Ion-exchange chromatography） 3.流动相 阴离子离子交换树脂作固定相，采用酸性水溶液； 阳离子离子交换树脂作固定相，采用碱性水溶液。 分离离子或可离解的化合物，常用于无机离子和生物物质的分离，例如碱金属、碱土金属、稀土金属等金属离子混合物的分离，；食品添加剂及污染物的分析；氨基酸、蛋白质、糖类、核糖核酸、药物等样品的分离。 4.应用 10.4 高效液相色谱法的分类 10.4.4 空间排阻色谱法 （Steric exclusion chromatography） 1.分离原理 按组分分子的尺寸大小和形状的差别进行分离。小分子可以扩散到凝胶空隙，由其中通过，出峰最慢；中等分子只能通过部分凝胶空隙，中速通过；而大分子被排斥在外，出峰最快；溶剂分子小，故在最后出峰。全部在死体积前出峰； 10.4 高效液相色谱法的分类 10.4.4 空间排阻色谱法 （Steric exclusion chr