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Gβ类似蛋白-WDR26对细胞增殖影响 　　摘　要：WD40重复序列蛋白是一类结构保守、功能复杂的蛋白。关于此类蛋白和细胞内信号传导途径的研究显示，该家族成员很可能通过调控胞内信号转导而影响细胞基本生命活动。在此前的研究中，我们报道了一个新基因WD40 repeatprotein 26的克隆。其初步研究结果显示WDR26蛋白与MAPK信号途径的负调控相关。在最近的研究中，我们构建了稳定转染pCMV－WDR26表达载体的HeLa细胞系，结果显示WDR26蛋白在HeLa细胞系中的过度表达，能够促进细胞分裂，加快细胞的倍增速度。因此，WDR26很可能具有通过MAPK信号途径调节细胞增殖的功能。 　　关键词：WDR26蛋白；MAPK信号途径；细胞增殖 　　中图分类号：Q753 　　文献标识码：A 　　文章编号：1007-7847(2006)02－0123－05 　　WD40重复序列蛋白(WDR)家族的成员广泛地存在于真核生物中，其中研究最为深入的是G蛋白的β亚基(Cβ)。此类蛋白以4～16个保守的WD重复序列为家族结构标志。一个典型的WD重复序列由大约40个氨基酸组成，包括氨基端的GH、羧基端的WD和以Trp-Aspmotif为核心的中间序列。结构分析说明，该家族成员具有保守的序列及空间结构，WD40蛋白质家族之所以广受关注，不仅因为引人注目的保守性空间结构，而且因为这一庞大家族所具有的异乎寻常的功能多样性――其成员在真核生物中广泛存在，影响着细胞生命活动的方方面面。参与信号传导过程的WDR蛋白，除了研究得最为详尽的Gβ外，还有磷酸化酶亚基、蛋白激酶C的锚定蛋白以及多个信号途径的调控因子，如hPIP2等。在RNA合成过程中，一些WDR蛋白是snRNP颗粒的组成部分。而作为转录调控因子的WDR蛋白则包括TATA-box结合复合体的TFIID亚单位。此外该家族成员还涉及从细胞骨架构建、纺锤体组装、小泡形成和运输，到细胞分裂的调控及霉菌中硫代谢的调控等细胞生命活动。 　　在此之前，我们报道过关于WDR家族一个新成员WD40 repeat protein 26(WDR26)的初步研究工作。其结果显示WDR26蛋白具有高度进化保守性。该蛋白包含5个WD40重复序列，与该家族成员――PAK抑制蛋白hPIP1具有相似的蛋白结构。表达分析说明WDR26在成体和胚胎期的多数组织中都有表达，因此很可能与多类细胞的基本生命活???相关。而进一步的转录激活活性分析显示，该蛋白能够抑制有丝分裂活化蛋白激酶(MAPK)信号途径的效应因子――SRE和Elk－1的转录活性，很有可能对MAPK信号途径起到负调控作用。 　　MAPK信号途径是细胞信号传导过程的重要组成部分。目前的研究表明，MAPK将G蛋白耦联的受体等膜转导蛋白与其细胞内的关键调控靶蛋白联系起来，从而介导胞外的多种信号，如胰岛素信号、表皮生长因子等，并将这些信号级联放大后传递给相应的下游因子，通过激活包括SRE、ELK-1、c-Jun、c-fos、MEF2、ATF2，等在内的多种转录因子，最终开启细胞特定功能基因的表达，从而调控细胞的生存及对外界的适应能力。在对细胞增殖的调节中，MAPK表现出正负两方面的调节活性。ERKl／2可通过氨基甲酰磷酸合成酶Ⅱ(一个嘧啶合成限速酶)的磷酸化作用来刺激DNA的合成。此外，ERK很有可能通过一些MAP―KAPK，如细胞周期抑制性激酶MYTl，来促进细胞周期进程。同时也可以通过激活蛋白激酶p90Rsk使减数分裂细胞停留在分裂Ⅱ中期。ERK还可以通过激活APl活性，诱导产生细胞周期蛋白D1，从而间接刺激细胞增殖。 　　基于WD40家族的保守性结构特征，其家族成员(如C蛋白β亚基，hPIPl)的重要生物学功能，以及此前研究结果所揭示WDR26的基本特性以及它与MAPK信号途径的潜在关系，我们相信该蛋白在细胞的基本生命活动中起着重要的调控作用。因此，在本文中我们进一步分析WDR26对于细胞增殖过程的影响。 　　 　　1　材料和方法 　　1．1　细胞培养、细胞生长计数与流式细胞仪分析 　　生物安全柜及CO2培养箱(37℃／5％ CO2)均购自Forma公司。含氨苄青霉素(100mg／L)(BBl)和链霉素(100mg／L)(BBl)以及10％胎牛血清(杭州四季青公司)的DMEM培养基(GIBICBRL)，PBS(GIBIC BRL)，胰酶(0．05％)(GIBICBRL)，G418(Clontech)等分别用去离子水配制并按相应要求灭菌或滤菌。细胞复苏、接种、传代、冻存均按常规操作进行。 　　将HeLa细胞接种于DMEM培养基(无抗生素，无胎牛血清)的10cm细胞培养皿中，培养过夜。使用磷酸钙转染方法进行pCMV-WDR26以及对照质粒pCMV(均