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棉花无菌苗培养条件探讨 　　摘要：以棉花（Ｇｏｓｓｙｐｉｕｍ ｈｉｒｓｕｔｕｍ Ｌ．）种子为试验材料，对无菌苗培养前种子消毒和接种的最佳条件进行了研究。结果表明，棉花种子消毒的最佳条件为１.0 ｇ／Ｌ升汞消毒５ ｍｉｎ或５０.0 ｇ／Ｌ次氯酸钠消毒１５ ｍｉｎ，无菌水冲洗５～６次，无菌水浸泡２４ ｈ，倒掉瓶中的无菌水后换上新的无菌水继续浸泡至种子露白约３～４ ｍｍ，手捏种子的子叶端挤掉种皮，胚根端接触培养基的方式接种至ＭＳ基本培养基。 　　关键词：棉花（Ｇｏｓｓｙｐｉｕｍ ｈｉｒｓｕｔｕｍ Ｌ．）；无菌苗；培养 　　中图分类号：Ｓ５６２；Ｓ３５１．２ 文献标识码：Ａ 文章编号：0439－８114（２０12）05－0887-03 　　 　　Ｄｉｓｃｕｓｓｉｏｎ on Ａｓｅｐｔｉｃ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｔｔｏｎ 　　 　　ＺＨＡＮＧ Ｆｕ－ｌｉ，ＧＥ Ｈｏｎｇ－ｌｉａｎ，ＪＩ Ｒｕｉ－ｊｉｅ，ＨＵＡＮＧ Ｙｕｎ－ｙｕｎ 　　（Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｂｒｅｅｄｉｎｇ，Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｚｈｏｕｋｏｕ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈｏｕｋｏｕ ４６６００0，Ｈｅｎａｎ， Ｃｈｉｎａ） 　　 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｏｆ ｓｅｅｄ ｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ ｂｅｆｏｒｅ ａｓｅｐｔｉｃ ｃｕｌｔｕｒｅ ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ using ｃｏｔｔｏｎ ｓｅｅｄｓ ａｓ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｍａｔｅｒｉａｌｓ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｂｅｓｔ sterilizing ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｃｏｔｔｏｎ ｓｅｅｄ ｗｅｒｅ soaking for ５ ｍｉｎ in １ ｇ／Ｌ ＨｇＣｌ２ ｏｒ １５ ｍｉｎ in ５０ ｇ／Ｌ ＮａＣlＯ， washing for ５~６ ｔｉｍｅｓ ｗｉｔｈ ａｓｅｐｔｉｃ ｗａｔｅｒ， soaking ｉｎ ａｓｅｐｔｉｃ ｗａｔｅｒ ｆｏｒ ２４ ｈ， ａｎｄ ｔｈｅｎ ｒeplacing ｎｅｗ ｓｔｅｒｉｌｅ ｗａｔｅｒ ｔｏ ｓｏａｋ ｓｅｅｄ ｕｎｔｉｌ ｓｅｅｄ ｂｕｄｄｉｎｇ to ａｂｏｕｔ ３~４ ｍｍ， squeezing the ｓｅｅｄ ｃｏｔｙｌｅｄｏｎ ｅｎｄ ｔｏ ｒｅｍｏｖｅ ｔｈｅ ｓｅｅｄ ｃｏａｔ， ａｎｄ inoculating ｏｎ ＭＳ ｂａｓｉｃ ｍｅｄｉｕｍ． 　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｃｏｔｔｏｎ（Ｇｏｓｓｙｐｉｕｍ ｈｉｒｓｕｔｕｍ Ｌ．）； ａｓｅｐｔｉｃ； ｃｕｌｔｕｒｅ 　　 　　棉花（Ｇｏｓｓｙｐｉｕｍ ｈｉｒｓｕｔｕｍ Ｌ．）是我国重要的经济作物，通过转基因手段进行遗传改良是获得优良棉花品种的有效方法之一。在其转化研究中，如何获取健壮无菌苗作为外植体建立组织培养的高频再生体系，是有效开展此项工作的前提和基础。因此，在无菌苗培养时，种子消毒以及接种等环节就显得相当重要。对前者而言，不仅要求消毒彻底，还要使药剂对无菌苗的伤害最低。如果无菌苗受到的伤害较大就会长势不良，且直接影响后续的外植体的再分化及高频再生体系的建立。在植物的无菌苗培养中，不同的植物消毒方法会有所不同［１］。对西瓜种子而言，２５０ ｍｇ／Ｌ二氧化氯与１．５ ｇ／Ｌ的升汞联合使用，污染率最低［２］。为了建立一套高效、稳定且对无菌苗生长影响最低的无菌苗培养体系，研究了不同消毒方法对棉花无菌苗种子消毒效果及无菌苗生长的影响，探索出了高效、稳定的消毒方法，以期为改进棉花无菌苗的培育技术提供依据。 　　１ 材料与方法 　　１．１ 试验材料 　　棉花种子由本实验室保存，选子粒饱满、颜色正常和大小基本一致的健康棉花种子为试验材料，７５％（体积分数，下同）乙醇、１．０ ｇ／Ｌ升汞、１０％（体积分数，下同）双氧水、１．０ ｇ／Ｌ硝酸银和５０．０ ｇ／Ｌ次氯酸钠４种药品作为消毒剂。 　　１．２ 试验方法 　　１．２．１ 无菌苗的获得 将棉花种子分成３份，一份用７５％乙醇表面预处理３ ｍｉｎ，另一份不用乙醇预处理，第三份则用乙醇表面预处理５ ｍｉｎ，然后分别用４种消毒剂进行消毒。４种消毒剂及消毒时间为：１０％双氧水消毒３ ｈ、１．０ ｇ／Ｌ升汞消毒５ ｍｉｎ、１．０ ｇ／Ｌ硝酸银消毒３０ ｍｉｎ和５０．０ ｇ／Ｌ次氯酸钠消毒１５ ｍｉｎ。每个处理共９０粒种子，其中３个重复中每个重复３０粒种子。处理后的种子用无菌水冲洗６～７次后接种在高压灭菌的ＭＳ固体培养基上，光照度为２ ０００ ｌｘ，２５ ℃温室中培养。 　　１．２