棉花黄萎病拮抗菌筛选及定殖效果初步研究.docVIP

棉花黄萎病拮抗菌筛选及定殖效果初步研究 　　摘要：对１２０株棉花内生菌对棉花黄萎病菌（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｄａｈｉｌａｅ）的抑制作用进行了研究，筛选出能够对病原菌产生抑制或拮抗作用的菌株。发现１5．8％的菌株对病原真菌有一定拮抗作用，具有强拮抗作用的菌株有３株，选取拮抗作用最强的Ｓ１１菌株进行棉苗入侵定殖效果研究，结果显示，采用菌液浇灌的方式，能从棉苗的根、上胚轴、下胚轴和子叶中分离发现菌株，在４种接种方式中菌株定殖效果最好。 　　关键词：拮抗菌；棉花黄萎病；筛选；定殖 　　中图分类号：Ｓ４３５．６２１ 文献标识码：Ａ 文章编号：0439－８114（２０11）09－1800-03 　　 　　Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ for Antagonistic Strains Against Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｄａｈｉｌａｅ ａｎｄ Pｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ Sｔｕｄｙ on the Cｏｌｏｎｉｚａｔｉｏｎ Eｆｆｅｃｔ 　　 　　ＦＡＮ Ｙｕ－ｇａｎｇ，ＷＡＮＧ Ｍｉ，ＷＡＮＧ Ｗｅｉ－ｄｏｎｇ，ＬＩＵ Ｎｉａｎ 　　（Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｙａｎｇｔｚｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｊｉｎｇｚｈｏｕ ４３４０２５，Ｈｕｂｅｉ，Ｃｈｉｎａ） 　　 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ： Aｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ ｂａｃｔｅｒｉum ｗｅｒｅ ｓｃｒｅｅｎｅｄ out ｏｆ １２０ entophyte ｓｔｒａｉｎｓ ｆｒｏｍ ｃｏｔｔｏｎ． Ｉｔ ｗａｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ １5.8% ｏｆ ｔｈｅｓｅ ｓｔｒａｉｎｓ ｈａd ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ， among which ｔｈｒｅｅ ｓｔｒａｉｎｓ ｈａd ｇｏｏｄ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ． Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａ Ｓ１１ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｂｅｓｔ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｗａｓ ｓｔｕｄｉｅｄ ｉｎ ｃｏｔｔｏｎ ｉｎｖａｓｉｏｎ ａｎｄ ｃｏｌｏｎｉｚａｔｉｏｎ. Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ bａｃｔｅｒｉａ lｉｑｕｉｄ ｉｒｒｉｇａｔｉｏｎ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈe ｂｅｓｔ ｃｏｌｏｎｉｚａｔｉｏｎ ｅｆｆｅｃｔ ｉｎ ｃｏｔｔｏｎ. Ｔｈｅ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｃｏｕｌｄ be ｓｅｐａｒａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｒｏｏｔｓ， ｅｐｉｃｏｔｙｌ， ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ ａｎｄ ｃｏｔｙｌｅｄｏｎ ｏｆ ｃｏｔｔｏｎ． Among the 4 inoculation mehtod， fix planting has bdst efficiency. 　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ； Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｄａｈｉｌａｅ； ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ； ｃｏｌｏｎｉｚａｔｉｏｎ 　　自１８９８年Ｖｏｇｌ从黑麦草种子内分离出第一株内生真菌以来，植物内生菌作为一种新的微生物资源受到了广泛的关注，从内生菌中寻找和发现新的活性化合物已成为国内外研究的又一热点。近年来，该领域的研究已取得一定进展，发现了一些有医用、农用价值的菌株和化合物［１］。 　　棉花黄萎病属于土传病害，防治极为困难。目前防治棉花黄萎病的物理、化学方法的效果都不理想，采用生物防治棉花黄萎病逐步取得较好的效果，且对环境无污染。利用生防菌的拮抗作用可以有效地抑制致病菌的生长，内生拮抗菌定殖于植物体内，作为生防菌有极大的优势［２］。从棉花组织中分离筛选到一株具有强拮抗作用的菌株Ｓ１１，用不同的方法将其接种到棉苗上，研究不同入侵途径的定殖效果，以期为棉花黄萎病的生物防治提供有效参考。 　　１材料与方法 　　１．１材料 　　１．１．１供试菌株供试内生菌菌株：采用表面消毒后稀释磨平板的方法从湖北荆州棉株样品中分离出１２０株内生菌株（表１）。病原真菌：棉花黄萎病菌（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｄａｈｉｌａｅ）菌株由南京农业大学实验室提供。 　　１．１．２仪器与药品仪器：千分尺，移液枪，打孔器，药匙，高压蒸汽灭菌锅，电热恒温鼓风干燥箱，水浴锅，隔水式恒温培养箱，生化培养箱，恒温摇床，离心机，育苗盘等；培养基：ＰＤＡ培养基、ＰＤ液体培养基、ＮＡ培养基；灭菌无土育苗混配基质（专利号２００７１００５３５８３．４）；棉花种子：鄂杂棉１０号棉子。 　　１．２方法 　　１．２．１平皿对峙法采用平皿对峙培养法进行内生菌和病原真菌间的皿内拮抗试验［３］。在ＰＤＡ平板上以原点为中心划垂直的十字，分别将病原真菌和内生菌沿一条直线等距离接种于平板两侧，以中央只接种病原真菌的平板为对照（ＣＫ）。放于培养箱中２８ ℃培养，２～７ ｄ后观察菌落生长情况。并测定抑菌带宽度。将抑