耳聋相关线粒体dna新突变筛查以及线粒体trnaile a4317g突变与耳聋关系的研究-screening of new mutations in mitochondrial dna related to deafness and study on the relationship between mutations in mitochondrial tr naile a4317 g and deafness.docxVIP

中文摘要目的1.通过收集温州地区聋哑学校的学生和温州医学院附属第二医院耳鼻喉科的门 诊患者的临床资料，了解温州地区耳聋的发病情况。2. 通过对耳聋患者线粒体 tRNAl.eu(阳)、 tRNAl1e和tRNAlYSDNA 突变的筛麓，深入地研究 线粒体DNA突变句耳聋的关系，发现新的与耳聋相关的线粒体 DNA突变。A4317G3. 对两个携带线粒体 tRNAl1e突变的中国汉族耳聋家系的临床、遗传和分子生物学特征进行分析，为耳聋基因的调查、耳聋诊断及预防提供分子流行病学数 据。方法 1.采集来自浙江温州地区聋哑学校的学生和温州医学院附属第二医院耳鼻喉科的门诊耳聋患者血液标本 226例。2. 采集温州正常对照人群血液标本 209例。3. 提取所采集血液标本的基因组 DNAo4. 用聚合酶链反应 (PCR) 扩增技术对线粒体 t刚Al.eu(1JllR)、 tRNA l1e和t刚ALJ8 区域进行 点突变筛查。5. 对PCR产物纯化后直接进行测序分析。A4317G6. 对发现的tRNAl1e突变进行该位点的工级结构分析和保守性分析。A4317G7. 对两个携带线粒体 tRNAI1e突变的中国汉族耳聋家系 FE163 家系和RAI09家系进行系谱分析，收集临床相关资料，对该两个家系进行昕力学检查，分析氨 基糖戒类抗生素对这两个家系耳聋外显率的影响。8. 对FE163家系和RAI09家系的先说者进行线粒体企基因组序列测序分析，分析其 线粒体单体型。9. 对FE163家系和RA109家系成员的GJB2基因的编码区进行突变检测，分析 GJB2对这两个家系耳聋外显率的影响。 结果1.对巳收集的226例温州地区聋哑学校学生和温州医学院附属第二医院耳鼻喉科植州医学院硕士学位论文的门诊患者进行线粒体 tRNALeu (删、 tRNA I1e 和tRNALYS基因突变的筛查，共筛查出 2名耳聋患者携带 mtDNA t刚AlleA4317G这个突变，突变频率为 0.88%。2. 在采集的209例温州正常对照人群的线粒体 DNA中没有发现tRNAlleA4317G 突变。3. 对发现的线粒体 t刚AI1eA4317G突变的工级结构分析发现该突变影响了 tRNAl1e 的 氨基毗化程度，导致 tRNA 的不稳定，影响蛋白质的合成。而对该位点的包括人类 在内的 14种灵长类动物物种间的保守性分析发现线粒体 tRNAlIe4317位点的保守 性指数为 85. 7%，是一个保中性很高的位点。4. 对两个携带线粒体 t刚AlJeA4317G突变的中国汉族耳聋家系 FE163家系和阳109 家系进行系谱、临床表现分析，发现这两个家系昕力损失的外显率和表现度都非 常高，其中FE163家系包括氨基糖试类抗生素耳聋和排除氨基糖戒类抗生素耳聋 时外显率分别为 89.5%和87.5% ，而RA109家系包括氨慕糖试类抗生素耳聋和排除 氨基糖试类抗生素耳聋时外显率分别为 88.9%和87. 悦。临床表现型的评估表明， 这两个家系中的患者的昕力损失的类型不一，阳 109家系中的两名母系成员|临床 表现除了感音神经性耳聋还有商血压症状。5. 对FE163家系和RA109家系的先证者进行线粒体企基因组序列测序分析，FE163 家系和RAI09家系的线粒体 DNA都属于东亚单体型，分别是 B4c和D4e1ao FE163家 系的线粒体DNA突变中除了tRNA lJe A4317G 同质突变外还存在 12SrRNA A1555G 同 质突变。在这两个家系的线粒体 DNA 中，我们没有发现以往报道影响耳聋外显率 的线粒体DNA多态位点，但在 FE163家系中发现了只有 C3571T(L创刊和8573A (G16D) 这两个错义多态在进化上是高度保守的，但其具体作用还有待于进一步的试验研 究证实。6. 对FE163家系和RAI09家系的家系成员的 GJB2基因的编码区进行突变检测， FE163家系成员GJB2基囚的编码区未发现突变和多态性位点，而在 RA109家系中， 先证者RAI09-皿寸 GJB2基因的编码区发现 235delC和512insAACG 的复合杂合突 变，其母亲 RA109寸1-2和弟弟RAI09-lli-2 GJB2基因的编码区发现 512insAACG 杂 合突变，其父亲 RA109寸卜1 GJB2基因的编码区发 235delC杂合突变。结论 1.我们对已经收集的 226例温州地区聋哑学校学生和温州医学院附属第二医院耳鼻喉料的门诊患者进行钱粒体 tRNALeu 恻、 tRNA lle 和tRNALys基因突变的筛菇，共筛查出2名耳聋患者携带 mtDNA tRNA I1eA4317G突变，而在209名温州正常对照的线粒 体DNA中并没