肺结核患者外周血tγδ17细胞的亚群研究以及结核杆菌抗原对诱导tγδ17细胞分化的影响-study on subsets of t γ δ 17 cells in peripheral blood of pulmonary tuberculosis patients and the effect of mycobacterium tuberculosis antigen on inducing differentiation of t γ .docxVIP

肺结核患者外周血Tγδ17细胞的亚群分析以及结核杆菌抗原对诱导Tγδ17细胞分化的影响?中文摘要研究背景：在宿主对结核分枝杆菌（Mtb）感染的免疫机制中，γδT细胞的作用越来越受到关注和重视。近年研究报道Mtb和卡介苗感染的小鼠模型中分泌IL-17的细胞主要来源于γδT细胞。本研究室近期的研究也发现活动性肺结核（TB）患者外周血中产生IL-17的γδT细胞（Tγδ17细胞）的比例明显高于正常健康人。但Tγδ17细胞是属于γδT细胞的何种亚群，以及肺TB患者的Tγδ17细胞的亚群类别与健康人有何不同，均尚未见报道。另外，虽然对于诱导Th17细胞分化的关键性细胞因子和转录因子已经明确，但是对于诱导Tγδ17细胞分化的细胞因子，转录因子和抗原的调节作用等影响因素的研究很少，尚有待探讨阐明。目的：检测TB患者和健康人（HD）外周血中Tγδ17细胞属于γδT细胞何种亚群（Vδ1、Vδ2及Vδ3-8亚群）探讨肺TB患者的Tγδ17细胞的亚群类别与健康人有何不同,以及结核杆菌（M.tb）耐热抗原（Mtb-HAg）、磷酸化抗原（HDMAPP）加入细胞因子诱导Tγδ17细胞分化有何不同，以探讨不同淋巴细胞亚群在抗M.tb感染免疫应答和TB发病机制中的作用。方法：1.采集70例活动性肺结核病人、100例HD和33例矽肺患者外周血，加入荧光标记单抗进行表面分子染色，流式细胞仪检测γδT细胞亚群（Vδ1、Vδ2及Vδ3-8亚群）的比例变化。2.采集24例活动性肺结核病人和17例HD外周血，加入佛波醇酯（PMA）和钙离子霉素（Ionomycin）刺激培养2小时后，再加入莫能霉素（Monensin）继续培养4小时，收集细胞，加入荧光标记单抗进行表面分子和胞内染色，流式细胞仪检测产生Tγδ17细胞亚群（Vδ1、Vδ2及Vδ3-8亚群）比例及。3.采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞（PBMC），加入Mtb-Hag、HDMAPP和细胞因子（IL-1β、IL-23和TGF-β）培养3天后，加入rIL-2刺激培养9天后，使其成为富含效应性γδT细胞的细胞群，收集细胞用PMA/Ionomycin和????本论文研究受国家自然科学基金项目的资助Monensin刺激培养6小时，用流式细胞仪检测Tγδ17细胞亚群的比例。结果：1、TB患者60岁初治组（n＝16）γδT细胞在T细胞中的比例（5.26%）低于正常人60岁组（n＝23）的比例（6.3%），TB患者60岁复治组（n＝16）γδT细胞在T细胞中的绝对值（74.52%）低于TB患者60岁初治组60岁组（n＝34）的绝对值（144.69）（绝对值单位为101/μl）。2、TB患者60岁初治组（n＝32）复治组（n＝16）的Vδ2+亚群在总γδT细胞中比例（60.06%和48.82%）明显低于正常人60岁组（n＝75）的比例（73.68%）（p均0.01）。TB患者60岁初治组（n＝32）复治组（n＝11）的Vδ1+亚群在总γδT细胞中比例（25.01%和22.61%）明显高于正常人60岁组（n＝75）的比例（11.82%）（p均0.05）。TB患者60岁复治组（n＝14）的Vδ3-8+亚群在总γδT细胞中比例（33.17%）明显高于正常人60岁组（n＝21）的比例（14.49%）（p0.05）。TB患者60岁初治组（n＝14）的Vδ1+亚群在总γδT细胞中的绝对值（3.71）明显低于TB患者60岁复治组（n＝10）的绝对值（11.71）。TB患者60岁初治组（n＝14）的Vδ3-8+亚群在总γδT细胞中的绝对值（3.03）明显低于TB患者60岁初治组（n＝32）的绝对值（14.89）（p均0.05.单位为101/μl）。3、结核病组Tγδ17细胞中以Vδ3-8亚群最多，其次为Vδ2亚群，最少为Vδ1亚群。正常组Tγδ17细胞以Vδ3-8亚群最多，其次为Vδ1亚群，最少为Vδ2亚群。其中正常组γδT细胞亚群:Vδ1亚群（n=14）、Vδ2亚群（n=18）和Vδ3-8亚群（n=14）的百分比分别为27.31%、10.52%和63.46%，而结核病组γδT细胞亚群:Vδ1亚群（n=23）、Vδ2亚群（n=24）和Vδ3-8亚群（n=23）的百分比分别为5.03%、10.52%和75.03%。4、从γδT细胞亚群的绝对值上进行比较，正常组中产生Tγδ17细胞的亚群类别中Vδ1亚群与Vδ3-8亚群绝对值相当，而结核病组产生Tγδ17细胞的亚群类别Vδ3-8亚群绝对值急剧升高。其中正常组γδT细胞亚群:Vδ1亚群（n=14）、Vδ2亚群（n=18）和Vδ3-8亚群（n=14）的绝对值分别为2.46、0.19和2.78，而结核病组γδT细胞亚群:Vδ1亚群（n=23）、Vδ2亚群（n=24）和Vδ3-8亚群（