肺痨康对耐异烟肼肺结核小鼠tlr2 tlr4 il2及mirna-155表达的 影响及作用机制初探-effects and mechanism of phthiskang on tlr 2 tl r4 il2 and mirna - 155 expression in mice with isoniazid - resistant pulmonary tuberculosis.docxVIP

中文摘要目的：考察中药肺痨康对耐异烟肼肺结核小鼠受体蛋白、细胞因子及miRNA表达的影响，初步探讨肺痨康治疗耐异烟肼肺结核的免疫-炎症机制。方法：本研究采用小鼠尾静脉注射法建立耐异烟肼肺结核动物模型，随机分为耐异烟肼组（模型组）、异烟肼组、肺痨康组及异烟肼联合肺痨康组，分别给予生理盐水、异烟肼、肺痨康、异烟肼联合肺痨康灌胃治疗56天；另设空白对照组，给予生理盐水灌胃。①比较小鼠一般体征及体重变化，造模4周后取小鼠肺脏组织进行细菌培养；治疗结束后肉眼及光镜下观察小鼠肺、肝、脾三脏组织病理变化。②免疫组化方法，检测各组小鼠肺组织中TLR2、TLR4、IL2的含量。③实时定量PCR检测法，测定各组小鼠肺组织中miRNA-155的表达水平。结果：①与空白组比较，模型组小鼠体重变化有统计学意义（P0.05），肺脏细菌培养可见明显菌落生长；与模型组比较，肺痨康及异烟肼联合肺痨康治疗可改善感染结核小鼠的皮毛、精神状况及进食等一般状态，使小鼠的体重正常增长（P0.05），使小鼠肺、肝、脾脏炎症显著减轻（P0.05）。②与空白组比较，模型组TLR2、TLR4含量明显升高（P0.05），IL2明显降低（P0.05）；与模型组比较，肺痨康及异烟肼联合肺痨康治疗对TLR2、TLR4的高表达有显著下调作用（P0.05），且能显著升高IL2的含量（P0.05）。③与空白组比较，模型组miRNA-155的表达显著上调（P0.05）；与模型组比较，肺痨康及异烟肼联合肺痨康治疗可明显抑制高表达的miRNA-155（P0.05）。结论：①从造模后动物的一般体征、客观指标及模型的稳定性等方面进行判断分析，采用小鼠尾静脉注射法建立肺结核小鼠模型是成功的。②肺痨康治疗耐异烟肼肺结核模型小鼠，能显著改善小鼠的一般体征及组织病变，减轻肺、肝、脾脏炎症反应，抑制TLR2、TLR4蛋白及miRNA-155基因的高表达，同时显著升高细胞因子IL-2的表达。③耐异烟肼结核分枝杆菌感染动物后可引起TLR2、TLR4及miRNA-155表达的显著上调，肺痨康对耐异烟肼肺结核的治疗作用机制可能是通过抑制TLR2、TLR4及miRNA-155的高表达，阻断相关炎症信号转导通路的激活及相关炎症基因的表达，减弱了由它们介导的炎性因子的释放，同时促进T细胞生长因子IL-2的分泌，增强机体免疫力，从而抑制炎症反应，减1轻组织病理损伤，起到免疫抗感染的作用。关键词：肺痨康耐异烟肼肺结核炎症反应免疫力2AbstractObjective：Investigatethereceptorprotein、cytokineandmiRNAlevelsinINH-resistantpulmonarytuberculosismiceinfectedwithChineseCompoundFeilaokang（FLK）,basedonimmune-inflammatorymechanismstopreliminaryexploretheeffectofFLKtodrug-resistanttuberculosis.Methods：EstablishingtheanimalmodelsofINH-resistantpulmonarytuberculosisthroughtailmainline,themicewererandomlydividedintothefollowinggroups:groupofINH-resistantbacterialstrain（modelgroup）,groupofINH,groupofFLK,groupofINHandFLK,andablankgroup.Thenormalsaline、INH、FLKweregivenseparatelyfor56days.①Tocomparewiththesignsandavoirdupoisofthemiceindifferentgroups.Bacterialcultivationoflungtissuewereusedafter4weekswhentheanimalmodelswereestablished.Observingthepathologicalchangesoflungtissue,livertissueandspleentissueattheendoftreatment.②ExaminingtheexpressionofTLR2、TLR4、IL2inlungtissuebyimmunohistochemicalstaining.③ExaminingtheexpressionofmiRNA-155inlungtissuebyreal-timePCR.Result：①Comparedwiththeblankgroup,theweig