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免疫分析方法 免疫分析技术的分类 ELISA应用实例 Thank You! DNM-9602G酶标分析仪 DNM-9602 标配酶标分析仪 DNM-9602A酶标分析仪 几种酶标分析仪 2.2放射免疫标记技术 放射免疫测定（radioimmunoassay，RIA）是1959年由Berson和Yalow首先用于糖尿病患者胰岛素含量的测定，是一种将同位素分析的灵敏性和抗原抗体反应的特异性这两大特点结合起来的免疫标记测定技术。 女科学家 R.Yalow（美,1921~）1950’末发明（胰岛素），1977年获诺贝尔医学奖 放射免疫优缺点 其优点是灵敏度高、特异性强、精确性好、样品用量少，而且不需要复杂的提纯步骤。缺点是需要特殊的仪器设备和一定的防护条件，而且有些同位素标记物的半衰期较短以及试验废物难以处理，对环境造成放射性污染。 基本原理 放射免疫测定是建立在待测抗原和标记抗原对有限量抗体进行竞争性结合的基础上。待测抗原是指人体内某种微量活性物质（如微生物＆寄生虫抗原、激素、维生素、酶、药物等），而标记抗原使将已知的上述物质标记上放射性同位素，具有示踪作用。 （1）竞争结合分析：Ag + Ab ? AgAb *Ag + Ab ? *AgAb （2）IRMA（免疫放射分析）： 常用标记核素： （1）125I： γ 射线，半衰期 60 天 （2）3H： β 射线，半衰期 12.3 年 测量仪器 （1）γ 计数仪 （2）β 液闪仪 放射免疫分析的临床应用 临床常用近 200 种 （1）肿瘤相关抗原的测定：AFP、CEA 、CA199、CA-125、CA153、CA724、CYFRA211、PSA 等 （2）激素的测定：下丘脑-垂体-甲状腺轴激素，下丘脑-垂体-性腺轴激素，下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴激素，胃肠道激素，心血管激素，甲状旁腺素与降钙素，生长激素等 （3）非激素蛋白质的测定：铁蛋白、各种尿微量蛋白、铜蓝蛋白、肌红蛋白、血栓素、III 型前胶原肽、层黏蛋白等 （4）酶的测定：前列腺酸性磷酸酶、SOD、NSE 等 （5）药物及维生素的测定：地高辛、叶酸、VitB12 等 （6）免疫分子的测定：各种 Ig、抗 DNA、IL、CD、CIC （7）病原学研究：现已基本淘汰，但细菌代谢产物的测定仍有一定的价值 （8）其它：甘胆酸、透明质酸等 基本原理 放射免疫测定是建立在待测抗原和标记抗原对有限量抗体进行竞争性结合的基础上。待测抗原是指人体内某种微量活性物质（如微生物＆寄生虫抗原、激素、维生素、酶、药物等），而标记抗原使将已知的上述物质标记上放射性同位素，具有示踪作用。 （1）竞争结合分析：Ag + Ab ? AgAb *Ag + Ab ? *AgAb （2）IRMA（免疫放射分析）： 常用标记核素： （1）125I： γ 射线，半衰期 60 天 （2）3H： β 射线，半衰期 12.3 年 测量仪器 （1）γ 计数仪 （2）β 液闪仪 应用：放射性免疫检测四环素类药物残留 测试原理 本方法的基本原理是微生物细胞表面存在着能与各种四环素类药物共有功能基团相结合的特异性位点，能与各种四环素类药物发生相应的微生物受体反应。检测四环素类药物残留时，同时加入微生物受体结合物和『3HI标记过的金霉素。如果样品中残留有四环素类药物，就会同[3H1标记过的金霉素竞争结合微生物受体结合物的相关位点。用液体闪烁计数仪测定样品反应后的【3H J含量的cpm值(count per minute，即每分钟脉冲数)，cpm值与样品中的四环素类药物残留量成反比。 免疫荧光技术 免疫荧光分析(Immunofluorescence assay，IFA)始创于40年代初，1942年Coons等多次报道用异氰酸荧光素标记抗体．检查小鼠组织切片中的可溶性肺炎球菌多糖抗原，当时由于此种荧光素标记物的性能较差，未能推广使用。直至50年代末期，Riggs等(1958)合成性能较为优良的异硫氰酸荧光黄。Mashall等(1958)对荧光抗体的标记方法又进行改进，从而使免疫荧光技术逐渐推广应用。 2.3荧光免疫分析（IFA） 常用荧光免疫的类型 （1）荧光免疫染色：主要用于抗原抗体的定位，用荧光显微镜观察 （2）荧光免疫测定 a. 荧光偏振免疫测定（FPIA） b. 荧光酶免疫测定（FEIA） （3）时间分辨荧光免疫测定（TRFIA） 基本原理　　 免疫荧光技术是将抗原抗体反应的特异性和敏感性与显微示踪