泥蚶谷胱甘肽过氧化物酶基因克隆和分析.doc

本科毕业论文（设计） 论文题目：泥蚶谷胱甘肽过氧化物酶基因的克隆和分析 所在学院 生物与环境学院 专业班级 生物工程063 学生姓名 学号 指导教师 职称 讲师 指导教师 职称 高级工程师 完成日期 2010 年 4 月 20 日 摘 要 本实验通过RACE法获得泥蚶谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase）基因cDNA全长序列并对其进行生物信息学分析。发现，泥蚶谷胱甘肽过氧化物酶不含硒，称为过氧化物酶6（TgPrx6）。泥蚶过氧化物酶6基因的全长cDNA为1937个碱基，其中开放阅读框为672个碱基，编码224个氨基酸。其次，用RNAfast200总RNA极速抽提试剂盒从泥蚶血液和其它组织中提取RNA，逆转录成cDNA。最后，采用PCR方法分析TgPrx6基因在不同组织中的表达情况，结果表明TgPrx6基因的组织表达有所差异。TgPrx6基因在内脏团中表达水平最高，其次是鳃和外套膜，在血液中的表达水平最低。 关键词：泥蚶；谷胱甘肽过氧化物酶（GPX）基因；过氧化物酶6；组织表达 ABSTRACT A whole length cDNA of glutathione peroxidase in Tegillarca granosa was got by RACE and the sequenced of bioinformatics was analysed. The glutathione peroxidase of Tegillarca granosa did not contain Se, which was called peroxidase 6（TgPrx6）.The whole length cDNA of TgPrx6 in Tegillarca granosa was 1937 bp, and the open reading frame was 672bp which could translate 224 amino acids. RNA was got by RNAfast200 Kit from blood and other tissues of Tegillarca granosa, then RNA was reversed transcriptase to cDNA. Finally, the gene of TgPrx6 was analysed to explore how the gene of TgPrx6 expressed in different tissues, and the result was that there were differences between tissues. The highest level of TgPrx6 expression was detected in viscera, and then gills and mantle. The lowest level was detected in blood . Key words：Tegillarca granosa; glutathione peroxidase gene; peroxidase 6; tissue expression 目 录 1 前言 1 1.1 泥蚶的介绍 1 1.2 谷胱甘肽过氧化物酶的介绍 1 1.3 谷胱甘肽过氧化物酶的作用 2 1.3.1 清除脂类氢过氧化物 2 1.3.2 清除H2O2 2 1.3.3 减轻有机氢过氧化物对机体的损伤 2 1.3.4 参与前列腺素合成的调节 3 1.3.5 其他作用 3 1.4 泥蚶谷胱甘肽过氧化物酶基因的研究意义 3 2 实验材料和方法 3 2.1 实验材料与试剂 3 2.1.1 材料 3 2.1.2 试剂 3 2.1.3 仪器 4 2.1.4 实验用品的预处理 4 2.1.5 电泳缓冲液和琼脂糖凝胶的制备 4 2.1.6 实验所用引物 4 2.2 实验方法 5 2.2.1 SMART技术构建全长cDNA文库 5 2.2.2 血液中总RNA提取 5 2.2.3 组织中总RNA的提取 6 2.2.4 cDNA第一链合成 6 2.2.5 cDNA检测 7 2.2.6 所设计引物的筛选 7 2.2.7 泥蚶Prx6基因组织特异性表达 7 2.2.8 目的基因的生物信息学分析 8 2.2.9 PCR产物的回收纯化 8 3 实验结果 8 3.1 血液和组织的RNA提取 8 3.2 设计引物的筛选 9 3.3 泥蚶Prx6 cDNA序列分析和推导的氨基酸序列 9 3.4 泥蚶Prx6基因与其它物种Prx6基因的系统