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1. 1 　 原理 TaqMan荧光探针：PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5－3外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。再通过实时监测整个PCR进程荧光信号的积累，与标准曲线对比进行定量分析。 SYBR荧光染料：在传统PCR反应体系中，加入过量SYBR荧光染料，SYBR荧光染料能特异性地掺入DNA双链，发射荧光信号，而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号，这样就保证了荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。当PCR循环复制时DNA双链也成倍增长，同样SYBR染料的荧光的信号也随之增倍，通过实时监测整个PCR进程中荧光信号的积累，与标准曲线对比进行定量分析。 二者不同点：实时荧光定量 PCR包括探针类和染料类两种 ,探针类是利用与靶序列特异杂交的探针来指示扩增产物的增加,由于增加了探针的识别步骤 ,特异性更高;染料类如 SYBR Green I则是利用与双链DNA 小沟结合发光的理化特征指示扩增产物的增加，不利用杂交原理，则简便易行 ,成本较低。荧光染料的优势在于它能监测任何 dsDNA序列的扩增,不需要探针的设计,使检测方法变得简便,同时也降低了检测的成本。然而正是由于荧光染料能和任何dsDNA结合 ,因此它也能与非特异的dsDNA(如引物二聚体)结合 ,使实验容易产生假阳性信号。引物二聚体的问题目前可以用带有熔解曲线(melting curve)分析的软件加以解决。 相同点：二者都利用荧光，都用于指示扩增产物的增加， 实时定量PCR的化学原理分为探针类和非探针类两种。探针类是利用与靶序列特异杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类则是利用荧光染料或者特殊设计的引物来指示扩增产物的增加。前者由于增加了探针的识别步骤，特异性更高，但后者则简便易行。 (1)T叫Man荧光探针：TaqMan探针是一种寡核昔酸探针，他的荧光与目标序列的扩增相关(图15—7，左)。他设计为与目标序列上游引物和下游引物之间的序列配对。荧光基团连接在探针的5’末端，而淬灭基团则在3’末端。当完整的探针与目标序列配对时，荧光基团发射的荧光因与3’端的淬灭基因接近而被淬灭。但在反应延伸时，DNA聚合酶的5’外切酶活性将探针进行酶切，使得荧光基团与淬灭剂分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与FCR产物形成完全同步。随着扩增循环数的增加，释放出来的荧光基团不断积累。因此荧光强度与PCR扩增产物的数量呈正比关系。 (2)SYBR荧光染料：SYBR GreenI是一种结合于双链DNA小沟的化学染料分子(图15—7，右)。在PCR反应体系中，通常加入过量的SYBRGreenI荧光染料，染料特异性地掺人DNA双链后，发射强荧光信号，而不掺人链中的染料分子仅有微弱的荧光信号背景，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。 二维差异凝胶电泳（two2－dimensional difference gel electrophoresis，2D-DIGE）是二维电泳技术的另一个突破，该技术应用两种不同的荧光染料Cy3和Cy5，分别标记不同的蛋白质样品，然后将两种样品等量混合，在同一2-DE中分离.通过在同一块胶上对比一个蛋白点处两种不同荧光的强度，比较两种状态下特定蛋白质丰度变化、蛋白质的缺失或是否有新蛋白质的出现等。DIGE克服了二维电泳过程中不同凝胶间重复性差的问题；同时可以在同一块胶上更精确直观地观察两种样品蛋白质的差异表达并对其定量。 超净工作台与生物安全柜的区别： 1.超净工作台原理：环境空气经过初效过滤器，由离心风机压入静压箱，再经过高效过滤器过滤后从出风面吹出，形成洁净气流，洁净气流以均匀的断面风速流经需要净化的区域，将该域内的尘埃带走，从而形成高洁净度的工作环境，为加大散流角，扩大净化范围，还可以在出风口设置散流器。 应24小时持续开风机。危险药物的悬浮颗粒和喷溅物通常沉积在工作区中很难吸入高效滤器中，并且生物安全柜的工作区通常为负压，一旦关掉风机，这些危险物便会污染环境。关掉风机前，必须彻底清洗生物安全柜，然后将其入口及高效滤器的排气口用塑料覆盖后用胶带封住BSL-3的处理对象是可通过气溶胶使人感染上严重的甚至是致命的致病因子，对人体，动植物和环境有高度危险，通常有预防治疗措施；BSL-4对人体，动植物和环境有高度危险性。通过气溶胶