钙网织蛋白在胃癌组织及胃癌细胞株中表达及其意义-expression and significance of calreticulin in gastric cancer tissues and gastric cancer cell lines.docxVIP

gGram克mlMilliliter毫升ulMicroliter微升μmol pmolmicromole picomole微摩尔 皮摩尔钙网织蛋白在胃癌组织及胃癌细胞株中的表达及其意义硕士研究生：黄红丽导师：聂玉强 教授中文摘要目的：胃癌是国内最常见的消化道恶性肿瘤之一，其发生、发展是多因素、多阶段的 过程，浸润与转移是近年来胃癌患者治疗效果无明显改善的主要原因。探讨胃癌发 生发展机制对指导胃癌临床诊治、改善患者预后有十分重要的意义。钙网织蛋白 (Calreticulin，CRT)是内质网和肌浆网中主要的Ca2+结合蛋白，与多种肿瘤的生长和 转移密切相关，目前CRT在胃癌中的表达及其与胃癌发生转移的关系尚不明确。本 研究分别从组织及细胞两个层面上检测CRT的mRNA及蛋白在胃癌及非癌正常胃粘 膜的表达情况，探讨CRT的表达与胃癌发生、发展的关系, 为胃癌的基因治疗提供新 的生物学靶点。方法：本实验研究分两部分：1．收集广州医学院附属广州市第一人民医院2009年4月至2010年8月外科手术切 除并经病理确诊的44例新鲜胃癌组织及非癌正常胃组织（术前均未接受任何抗肿瘤 治疗），采用SYBR Green I实时荧光定量PCR和免疫组化方法检测CRT的mRNA及蛋 白在胃癌组织及癌旁正常胃组织中的表达情况，并结合性别、年龄、组织学类型、 临床分期、肿瘤大小、淋巴结转移等临床病理因素，分析它们表达的相关性，探讨 它们之间的关系及其在肿瘤发生转移中的作用。2．正常胃粘膜上皮细胞株 GES-1 及 3 种胃癌细胞株(高分化胃腺癌细胞株MKN28、中分化胃腺癌细胞株 SGC-7901、低分化胃腺癌细胞株 BGC-823)培养于含胎牛血清的 RPMI-1640 培养液中，采用实时荧光定量 PCR 及细胞免疫荧光结合激光扫描共聚焦显微镜技术检测 CRT 基因在 3 种不同分化胃癌细胞株及正常胃粘膜 上皮细胞株的表达情况，从细胞分子层面上探讨 CRT 在人胃癌细胞株和正常胃粘 膜细胞株表达上的差异。结果：1．（1）胃癌组织中CRT的mRNA表达水平（M＝36.4998）低于正常胃组织（M＝48.1902，P=0.031），在有淋巴结转移的胃癌组织中的表达（M＝29.2200）显著低 于无淋巴结转移的胃癌组织（M＝67.8500，P=0.023）, 高分化癌CRT的mRNA表达（M＝152.240）明显高于中分化癌（M＝36.7600）、低分化癌（M＝31.1550）（P=0.009）。CRT基因的mRNA表达与性别、年龄及肿瘤大小、TNM分期无明显相关（P0.05）。（2）CRT蛋白主要定位于细胞浆中，在胃癌组织中其阳性表达率明显低于癌旁组织（34.09％vs77.27％，P=0.000），其中CRT蛋白的表达与患者的年龄、性别、肿瘤大 小、TNM分期无相关性（P＞0.05），而与肿瘤分化程度、淋巴结转移有关（P 0.05）。2．CRT mRNA在4种细胞系均有表达，与正常胃黏膜上皮细胞相比，高、中、 低分化胃癌细胞株中CRT mRNA的表达量均下调，表达强度依次为GES-1 MKN28 SGC-7901 BGC-823(P=0.000)；细胞免疫荧光染色显示CRT蛋白主要表达在细胞浆 中，在4种细胞系中随着胃癌细胞分化程度的降低其表达水平逐渐减少(P=0.000)。 结论:1．CRT在胃癌组织中低表达，与淋巴结转移、胃癌分化程度密切相关。2．胃癌细胞株中CRT的表达下调，且分化程度越差其表达水平越低。3．CRT是一项有潜在价值的胃癌相关标记物，有希望成为胃癌基因治疗新的生 物学靶点。【关键词】胃肿瘤；钙网织蛋白；基因；转移Expression and Significance of Calreticulin in Gastric cancer tissue and gastric cancer cell linesPostgraduate: HUANG Hong-li Tutor: Professor NIE Yu-qiangABSTRACTObjectives:Gastric Carcinoma is one of the most common gastrointestinal cancers, and its development is a multi-factor and multi-stage process.However, the therapeutic effect has not shown a significance improvement up to now. The main reason is invasion and metastasis of tumor when diagnosis was made. F