肝细胞癌中tgf-β1和e-cadherin的表达意义及二者相关性-expression of tgf - β 1 and e - cadherin in hepatocellular carcinoma and their correlation.docxVIP

独创性声明本人郑重声明，本学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果的总结。尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本人将承担本声明引起的一切法律后果。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本论文属于保密□，在年解密后适用本授权书。不保密□。（请在以上方框内打“√”）学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日前言肝细胞癌HepatocellularCarcinoma，HCC）是常见的恶性肿瘤之一，是全球第六大肿瘤。肝细胞癌具有进展快，易转移和复发的特点；其预后差，是造成癌症相关死亡的第三大病因[1]。肝细胞癌病因非常复杂，有很多因素影响着患者的病程和预后。随着分子生物学和生物技术的发展，肝细胞癌发生和进展机制的研究逐渐深入。转化生长因子-β1（Transforminggrowthfactor-β1，TGF-β1）是一个分泌型多肽生长因子家族中的一员，在各种肿瘤组织中均有表达。在体外实验中它可以促进多种恶性肿瘤细胞系的生长，在肿瘤微环境中可作为一个肿瘤启动因素[2]。它能诱导肿瘤细胞增殖，促进血管生成，增加其侵袭能力；在这个过程中伴随着细胞上皮间质转化，表现为细胞上皮分子表型的缺失[3]。E-钙粘蛋白(E-cadherin)是一种重要的细胞粘附分子，主要表达于上皮细胞细胞膜，在维持器官发育和组织完整性上发挥着重要作用。E-钙粘素的表达缺失与许多疾病的病理过程有关，包括组织异常增生，肿瘤形成和转移[4]。人类大多数肿瘤均来源于上皮组织，例如肝细胞癌。上皮间质转化（epithelial-mesenchymaltransition，EMT）是重要的肿瘤启动步骤，在细胞上皮间质转化过程中常伴随着E-钙粘素的表达缺失[5]。在体外实验中TGF-β1可诱导多种癌细胞E-钙粘素的表达缺失，并增加其侵袭转移能力；而阻止或抑制TGF-β1信号通道可诱导癌细胞E-钙粘素表达[6,7]。据报道证实TGF-β1可能使人头颈部鳞状细胞癌、肺癌E-cadherin表达缺失[36，44]，参与了上皮间质转化和肿瘤的侵袭转移过程，然而在人肝细胞癌组织中，目前还没有相关的研究报道。本实验通过免疫组化SABC法检测45例肝癌组织和30例癌旁组织中TGF-β1和E-cadherin的表达，并比较TGF-β1和E-cadherin在两种不同组织中的表达差异，探讨其与肝细胞癌病理分期，侵袭程度等临床病理特征的关系。材料和方法1研究对象：收集武汉市协和医院2009年5月至2009年10月手术切除，病理明确诊断为肝细胞癌组织标本45例。所有患者术前均未接受化疗及其它抗肿瘤治疗。其中男性39例，女性6例；Edmondson-steiner分级Ⅰ-Ⅱ级有13例，Ⅲ-Ⅳ级有32例；有癌栓组织有23例，无癌栓的有22例；包膜完整的有13例，不完整的有32例。在45例肝癌癌旁组织标本中选取30例癌旁组织作为对照。所有组织均石蜡包埋，4μm连续切片后进行实验。2实验材料：2.1主要仪器LeicaRM2235石蜡切片机德国Leica公司恒温水浴箱国华电器公司精密电子天平福州科迪公司恒温烤箱上海跃进公司微波炉Galanz公司4℃冰箱海尔公司光学显微镜及摄像系统Nikon公司2.2主要试剂TGF-β1兔抗人抗体Santa-Cruz公司E-cadherin兔抗人抗体Santa-Cruz公司生物素化羊抗兔二抗IgG北京中杉公司SABC复合物三抗Sigma公司牛血清白蛋白BSAAmresco公司DAB显色剂Amresco公司PBS缓冲液实验室配制其余试剂如：甲醛、二甲苯、乙醇（100%，95%）、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、1%盐酸酒精、中性树胶等由实验室提供。2.3主要试剂的配制(1)0.01MPBS(PH7.2-7.4):NaH2PO4·2H2O1.4gNa2HPO4·12H2O16.67gNaCl42.5gDDW5000ml(2)0.2MTBS:Tris碱1NHClDDW4.85g4ml200ml(3)4％BSA:0.2MTBS2.5mlBSA1g5％NaN3DDW500ul22.5ml(4)抗体稀释液：0.2MTBS4％BSA5％NaN3DDW4ml500μl1600μl35ml3实验方法采用免疫组织化学检测标本中TGF-β1和E-cadherin的表达。