中药指纹图谱的测定培训资料.pptVIP

中药指纹图谱的测定晁若冰（四川大学华西药学院）; 一、测定中药指纹图谱的意义 中药指纹图谱的定义: 中药指纹图谱（Fingerprint）是经光谱、色谱或其他方法测定得到的中药组分群的特征图谱，带有综合、宏观、“模糊”的非线性特征，具有完整性和唯一性，是评价中药质量的重要手段之一。; 测定中药指纹图谱的意义： 1. 对保证用药的安全、有效，保证药品质量的稳定具有意义。 2. 有利于中药作用机理的进一步深入研究。 3. 可以促进中药工业现代化，中药农业现代化。 4. 可以促进中药走向世界。 ; 二. 检测方法 （一）色谱法 1. 薄层色谱法（TLC） 薄层色谱法分离效能高，操作简便，图像直观、形象，有多种显色剂供选择使用，可以作多样品的平行分析，使用薄层扫描法可以得到定量的薄层指纹图谱。 需使用标准的材料和条件，才能得到高质量的、可重复的结果。 薄层色谱法多用于无紫外吸收，不能用HPLC测定的样品，也可以作为HPLC的补充和佐证。 ;  二. 检测方法 2. 高效液相色谱法(HPLC) 高效液相色谱法分离效能高，重复性好，准确性高，适用范围广，是指纹图谱测定应用最多的方法。 使用的检测器有：紫外检测器，蒸发光散射检测器，示差折光检测器，质谱（LC-MS）等。 多用反相色谱，也可以使用吸附色谱。如组分保留时间的差别很大，可以使用梯度洗脱。;二. 检测方法;二. 检测方法;二. 检测方法; 三. 色谱指纹图谱研究的技术要求 ;（一）供试品的收集;（一）供试品的收集;（一）供试品的收集;;（三）测定方法;（三）测定方法;（三）测定方法;（三）测定方法;（三）测定方法;（四）色谱指纹图谱标准的建立 ;（四）色谱指纹图谱标准的建立;（四）色谱指纹图谱标准的建立;（四）色谱指纹图谱标准的建立;（四）色谱指纹图谱标准的建立;; （2）通过相似度判断; ② 中位数矢量 中位数矢量＝median(X1j,X2j….Xnj) 中位数矢量是把对应的矢量按大小排列，取处于当中的矢量作为对照模式。如果样品数为奇数时，中位数只有1个；样品数为偶数时，中位数是当中两个数的平均值。 推荐使用平均矢量。; 相似度的计算： 把供试品和对照模式的指纹图谱作为两个矢量，矢量(x1, x2, …, xn)代表样品X的图谱，其中xi代表样品X图谱中第i个色谱峰的峰面积；矢量 (y1, y2 ,…,yn) 代表对照模式Y的图谱，yi代表对照模式图谱中第i个色谱峰的峰面积。可以用下面两种方法表示相似度。; ① 相关系数 相关系数＝ 相关系数越接近于1，两个样品越相似。 ; ② 夹角余弦 夹角余弦＝ 夹角余弦是矢量 (x1, x2, …, xn) 和 (y1,y2,…,yn) 在矢量空间夹角的余弦。两张图谱可用多维空间中的两个点来代表，两个样品越相似，则其夹角越小，夹角的余弦值越接近于1；当两个样品等同时，夹角为0，夹角余弦等于1。; 若2个样品中分别只有2个色谱峰，则每个样品可以用二维的向量来表示。2个样品可以表示为直角坐标系中的两个点，其夹角为α。 ;A (x1, x2); α = β–γ 根据差角余弦定理， cos α = cos( β–γ ) = cosβ cosγ + sinβ sinγ = =  = 一般相关系数或夹角余玄在0.9－1.0之间，相似度符合要求。;（六）方法的考察 1．色谱系统适用性试验 一般按参照物计算。包括：柱效，主要色谱峰的分离度。 2．精密度 包括日内精密度，日间精密度，重复性。计算保留时间、相对保留时间和峰面积的RSD值，也可以计算一组测定结果的相似度。  3．耐用性 使用三根不同的色谱柱进行比较。 ;（七）应用示例