尾悬吊模拟失重对大鼠胰腺分泌功能及其组织中hsp70表达的影响-effects of tail suspension simulated weightlessness on pancreatic secretion function and hsp 70 expression in rats.docxVIP

中英文缩略词对照表英文缩写英文全称中文全称BCIP5’-Bromo-4-chloro-3-indoxylphosphate5’-溴-4-氯-3-吲哚磷酸盐CCKcholecystokinin胆囊收缩素cDNAComplementaryDNA互补脱氧核糖核酸DEPCdiethylpyrocarbonate焦碳酸二乙脂dNTPdeoxy-ribonucleosidetriphosphate脱氧核糖核苷三磷酸ECMextracellularmatrix细胞外基质GAPDHGlyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase甘油醛-3-磷酸脱氢酶Hsp70Heatshockprotein热休克蛋白HSF-1heatshockfactor-1热休克转录因子-1HPAHypothalamus-pituitary-adrena下丘脑-垂体-肾上腺皮质IL-1interleukin-1白细胞介素-1IRinsulinresistance胰岛素抵抗MAPKsmitogen-activatedproteinkinase丝裂原活化蛋白激酶mRNAMessengerRNA信使RNANF-κBnuclearfactor-kappa-bingding核因子-κBPVDFPolyvinylidenefluoride聚偏二乙烯氟化物PBSPhosphate-bufferedsaline磷酸盐缓冲液PSCspancreaticstellatecells胰腺星状细胞PDTCpyrrolidinedithiocarbamatePHHIPersistentHyperinsulinemicHypoglycemiaInfancy四氢化吡咯烷二硫代氨基甲酸酯持续性幼儿型胰岛素过度分泌低血糖症ROSreactiveoxygenspecies活性氧RT-PCRreversetranscriptionPCR逆转录-PCRSTAT3Signaltransducerandactivatoroftranscription3转录激活因子尾悬吊模拟失重对大鼠胰腺分泌功能及其组织中Hsp70表达的影响摘要背景和目的：近年研究发现，失重或模拟失重对人体呼吸、循环、内分泌、生殖等系统产生较大影响，甚至导致病理性改变。胰腺作为较大的分泌器官之一，亦会受到影响。本实验研究尾悬吊模拟失重应激对大鼠胰腺分泌功能及胰腺组织中Hsp70表达的影响。研究方法：(1)成年Wistar大鼠64只，按模拟失重时相分8组（n=8），分别为6h、12h、1d、2d、3d、5d、1wk及0h（对照组），采用尾悬吊法建立模拟失重大鼠模型。(2)各组实验结束后，腹腔注射水合氯醛（300mg/kg）将实验组及对照动物麻醉，碘伏局部消毒，外周静脉取血备用，剖腹取胰体尾部组织保存于-80°冰箱中，胰头组织浸于10%甲醛中固定。(3)应用放射免疫分析法和生化法测定大鼠静脉血糖、胰岛素、胰高血糖素、C肽、血清淀粉酶及脂肪酶值。(4)应用免疫组化、Western-blot及RT-PCR技术检测胰腺组织中Hsp70蛋白及Hsp70mRNA表达。结果：(1)失重Wistar大鼠血糖值波动明显，表现为先升后降再升再回落的特点，血清胰岛素水平短期内升高，6h形成峰值，随后与C肽同期降低，3d时降至低谷，同期血清胰高血糖素水平高于正常值；在尾悬吊早期，血清淀粉酶和脂肪酶呈一过性升高；各项检测指标均不同程度的表现为早期变化明显、后期趋向恢复的特点。(2)免疫组化结果显示，Hsp70蛋白阳性表达为棕褐色，实验各组大鼠胰腺组织中均有Hsp阳性表达；悬吊6h–2d各组大鼠胰腺组织染色变深，尤其胰岛细胞的胞核在模拟失重早期即深染，期间腺泡细胞的胞浆及胰岛细胞的泡浆染色亦增强。悬吊3d–5d组大鼠的胰腺组织中Hsp蛋白染色又逐渐变浅。阴性对照图组的胰岛细胞和腺泡细胞均未见着色。(3)Western-blot分析结果显示，Hsp70蛋白在各实验组及对照组大鼠胰腺组织中均有不同程度的表达，悬吊6h组Hsp70蛋白表达水平显著升高，12h、1d、2d组的Hsp70蛋白持续高表达，与对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05），3d后Hsp70表达水平下降，3d、5d、1wk三组动物的Hsp70表达水平与对照组相比基本持平。(4)RT-PCR检测结果显示，模拟失重各组及对照组大鼠胰腺组织中均有Hsp70mRNA表达，表现为早期上升后期回落的特点。尾悬吊6h大鼠胰腺组织中Hsp70mRNA表达水平即升高，与对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。12h、1d、2d各组的Hsp70mRNA表达逐渐回落至正常水平，3d组降至最低点，其后又出现上升趋势。结论：(1)尾悬吊模拟失重能引起大鼠胰腺分泌功能的变化，其中以血糖波动最明显，提示包括胰