仪器分析课件05分子发光分析法讲解材料.pptVIP

共振光散射 瑞利散射 拉曼光 二级共振光散射 三级共振光散射 散射光的影响 荧光分析中常出现Retleigh散射光、容器表面的散射光、Tyndall及拉曼散射等，波长选择适当，可以消除其影响 固定?ex=270nm 硫酸喹啉及其溶剂（硫酸溶液）在不同激发波长下的光谱 瑞利散射与激发光波长相等 拉曼散射与激发光波长有关 荧光与激发波长无关且红移 溶液荧光的淬灭 能引起荧光物质荧光强度降低的物质称为淬灭剂，常见淬灭类型有一下几种： 碰撞猝灭（碰撞后无辐射失活） 静态猝灭（形成非荧光配合物） 转入三重态猝灭（发生系间跨越，如存在重原子或溶解氧） 电子转移猝灭 基于荧光淬灭现象可实现淬灭剂的分析 自猝灭 250 350 450 nm F 1 2 3 4 丁二酮in CCl4 1 0.015 mol/L 2 0.045 mol/L 3 0.150 mol/L 4 0.450 mol/L 5-1-2 荧光/磷光光谱仪（1） 光源 激发光单色器 样品池 检测器 数据处理 仪器控制 发射光单色器 与UV-Vis仪器相比： ?有两个独立的单色器，分别位于光源与样品池之间（激发光单色器）和样品池与检测器之间（发射光单色器） 光源与检测器不在同一光路上，以避免透射光的影响（吸收池四面透光） 5-1-2 荧光/磷光光谱仪（2） 光源：通常采用氙灯。激光最为理想，高压汞灯也被采用。 单色器：位于样品池前后独立两个，用于选择激发/发射波长 样品池：熔融石英制成，四面透光（固体可直接测定） 检测器：通常采用光电倍增管（PMT），其他光电检测器也被采用（如二极管阵列）。 Perkin-Elmer LS50 Fluorimeter Perkin-Elmer LS50 样品腔 5-1-3 荧光/磷光分析法应用（1） 定量分析方法（标准曲线法） 确定测定波长?ex/?em 设定?ex/ ?em及适当狭缝宽度 测定标准系列的If，绘制If-c曲线 测定未知样品的If，根据标准曲线求其浓度 需配制适当的空白溶液校正空白信号 检出限低于UV-Vis，但重现性不如UV-Vis 第五章 分子发光分析 Molecular Luminescence Analysis 分子发光分析（1） 分子吸收一定能量后外层电子将由基态跃迁至激发态，若从激发态返回基态时伴随光辐射现象，即称为分子发光，基于该现象的分析方法为分子发光分析法（UV-Vis区） 分子发光的类型 光致发光 化学发光 生物发光 按激发模式 荧光 磷光 按激发态类型 分子发光分析（2） 分子发光与UV-Vis应用范围相似，但具有以下特点： 灵敏度高；检出限较UV-Vis法低2?4个数量级 原因：a. 黑背景检测；b. 荧光强度与光源强度呈正比 选择性好； 线性范围宽； 发光参数多且对所研究体系局部环境因素敏感； 在光学分子传感器及生物医学、药学和环境科学方面具有优势 适用体系不如UV-Vis广泛。 5-1-1 分子荧光/磷光分析原理（1） 分子荧光/磷光产生 激发态分子 基态分子 单色器 检测器 光源 激发态的类型？激发态分子不稳定，当其返回基态时，多余的能量将以何种途径释放？ 单重态与三重态 基态 激发单重态 激发三重态 基态单重态至激发三重态为禁阻跃迁（难发生）； 磷光的产生 ?吸收 激发单重态 ?荧光 ?无辐射跃迁 激发三重态 系间跨越 ?磷光 系间跨越 磷光 振动驰豫 内转换 外转换 振动驰豫 磷光也是带状光谱 磷光较荧光光谱红移 磷光较荧光寿命长 荧光发射：10-9 ?10-7 s 磷光发射：10-4 ?10 s 荧光与磷光可能共存 内转换 振动驰豫 振动驰豫 5-1-1 分子荧光和磷光分析原理（3） 任何荧光（磷光）化合物都具有激发和发射两个特征光谱，这是对其进行定或量定性的基础。 激发光谱：即激发效率随波长变化的曲线。激发的本质就是物质吸收光的过程，因此激发光谱与吸收光谱相似。 发射光谱：又称荧光（磷光）光谱，指激发波长固定时，发光强度对波长变化的曲线。 镁-Oxine的激发光谱和发射光谱 激发光谱与发射光谱的绘制 激发光谱：改变激发波长，测量最强荧/磷光发射波长?em处的强度变化，以激发波长对荧/磷光强度作图可得到激发光谱。 发射光谱：固定激发波长在最大激发波长?ex处，测定不同发射波长处的荧/磷/光强度，以发射波长对荧/磷光强度即可得的荧/磷光的发射光谱。 激发光谱 发射光谱 如何确定?ex和?em？ 来源于资料或文献（需进行验证） 先以该分子的?max作为?ex扫描发射光谱，可得?em；再固定?em扫描激发光谱，可得?ex；若?ex=?max，终止扫描，若?ex?=?max，应反复扫描直至?ex、?em不再发生变化。 发射光谱形状通常与激发波长无关，因此只需少数几次扫描，