普通植物病理学实验实习三 病原物的分离培养教学讲义.pptVIP

普病实习;实习三 病原真菌的培养性状 及生长量的测定;一、目的要求 了解几种常见植物病原真菌在平板上生长的特性以及不同病原真菌的生长速率。 二、材料、用具及仪器 香蕉灰纹病等分离菌种 PDA平板 镊子、挑针、载玻片、盖玻片、显微镜、擦镜纸、吸水纸、米尺、打孔器、接种环、消毒液（70%的酒精）、 微波炉、超净工作台、恒温培养箱 ;三、实验步骤 （1）PDA平板的制备 将已经准备好的培养基在微波炉上融化后倒入灭菌的培养皿中，冷却凝固备用。 （2）a:纯化--用直径为4mm的打孔器在已分离病原菌菌落边缘打菌块，用无菌的接种针接种到平板中央，置于28℃下培养箱中培养3-5天。b:制作临时玻片，镜检，大致确定病原菌分类。 （3）取纯化后的PDA平板，在第3、5、7天分别测量菌落生长量—测菌落半径、计算其面积。 （4）注意观察菌落的培养性状。;实习四 真菌孢子的萌发及的记数;3.孢子的记数 计数器计数法：孢子的计数最好是用计数器。计数器的种类很多，纽鲍尔(Neubauer)血球计数板是常用的一种。它是一块很厚的载玻片，上面划有每边长为0.05mm的小方格，每小格的面积是0.0025mm2。加盖玻片后，小格的深度是0.1mm，所以每小格的容积是0.00025mm3，它的体积是1／4000000mL。测数时，先将盖玻片放在计数汁上有刻度的位置，从盖破片的一侧加小滴适当稀释的孢子悬浮液，然后在显微镜下观察每小格中孢子的数目；观察80小格，以它的平均数乘以4000000。就是1毫升悬浮液中孢子的数目。; 实习五 病原菌的接种;（1）喷雾法 喷雾法是将孢子（或菌丝）悬浮液喷洒在寄主表面，常用于接种由气流和雨水传播的病害。病菌可以从气孔、伤口或表皮直接侵 （2）喷撒法 喷撒法是用于接种锈菌和白粉菌，可将干的病菌孢子喷撒在潮湿的植物表面上。白粉菌和锈菌的孢子可与滑石粉混合后放在小喷粉器中喷。加滑石粉的量是孢子量的10倍左右。 （3）涂抹法 如接种麦类锈菌，由于寄主表面和锈菌孢子都不易沾湿（不宜用喷洒法接种），一种接种法是先用手指沾水摩擦叶片，使表面有一薄层水膜，然后将孢子涂抹在上面。喷雾、喷撒和涂抹接种后的植物，必须保湿约24～48h，使病菌的孢子能够萌发和侵入。 （4）注射法 注射法是将病菌孢子悬浮液用注射针注入寄主的生长点或幼嫩部分，发病往往可以很重。这种方法用于接种麦类锈菌及玉米瘤黑粉菌等的效果很好，也适用于一些其他病害的接种。 （5）针刺法 接种伤口侵入的病菌，如果实、块茎、块根等的腐烂病菌，一般是用灭菌的针刺伤寄主组织，然后将病菌接种在伤口内。有些枝干病害也可用这种方法接种。;一、实验目的： 学习病原菌孢子悬浮液的制备与接种方法，进一步认识病原菌的致病过程。 二、实验材料： 病原菌：香蕉灰纹病病原菌（Bortytis cineania）、大头针、喷壶、等 健康的香蕉 三、实验步骤 1.灰纹病孢子悬浮液的制备 2.接种方法 （1）喷雾法： （2）针刺法：菌饼和滤纸片两种方法 四、实验结果 1.观察并记录香蕉发病的过程 2.比较两种接种方法。