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博阳生物科技（上海）有限公司 LiCALiSA 方法学开发指导 博阳生物科技（上海）有限公司 目 录 I． 开始之前 4 II． 用途 5 III． 测试原理 6 IV． 测试项目开发 6 A ． 寻找抗体配对 7 B． 抗体生物素化 8 C． 抗体连接LiCALiSA 发光微粒（Acceptor Bead ） 8 D． 最佳抗体对的确定 10 E． 测试缓冲液的优化 15 F． 测试量、孵育时间和加样顺序的优化 16 G． 通过引入定标曲线对未知样品中的分析物水平进行测定 17 附录I：LiCALiSA 测试项目开发步骤汇总 19 附录II：血清样品的准备 19 - 2 - 博阳生物科技（上海）有限公司 提醒 链霉亲和素感光微粒（Donor Bead）（本手册中被称为链霉亲和素感光微粒）对光敏感。 采用此链霉亲和素感光微粒微粒的所有测试，都应该在小于100 勒克斯的暗弱的实验室 光照下进行。作为替代，可以在光照装置上采用绿色滤光器（例如，Rosco Laboratories 有限公司的#389 Roscolux 滤光器或类似物）。链霉亲和素感光微粒的所有孵育都应该 在避光条件下进行。 由于测试中用到的液量体积少，因此建议采用粘性封膜将微孔板进行覆盖，以减少孵育 期间的蒸发。 发光微粒在储存溶液中放置数日会出现轻微的沉淀。这是正常的。建议在使用前将此微 粒旋匀。 应将链霉亲和素感光微粒和发光微粒置于4°C 避光条件下保存。 仅用于科研目的，不能在诊断程序中应用。 - 3 - 博阳生物科技（上海）有限公司 I． 开始之前 试剂供应 如下规格是可提供的： 1 mg （LS 3100AS），5 mg （LS 3100AM），50 mg （LS 3100AL） 表I：试剂供应 1mg 5mg 50mg 组成 LS 3100AS LS 3100AM LS 3100AL 发光微粒 200 µL 1000 µL 5×1000 µL 储存于含0.1 M 0.05% Proclin-300 （5 mg/mL ） （5 mg/mL ） （10mg/mL） pH 8.0 的Tris-HCl 缓冲液中 使用前注意事项 在取下盖子前稍稍旋转瓶身，并通过旋转使微粒重新悬浮，从而获取最大的内容 物量。 应将发光微粒置于+2 至+8°C 下保存。 - 4 - 博阳生物科技（上海）有限公司 推荐的其它试剂和材料 表II：推荐的试剂和材料 物品 公司 货号 链霉亲和