第6篇 章色谱分析法 体内药物分析课件,药物分析研究生复试用.重点已标红.ppt

第六章 色谱分析法;内容;第一节 薄层色谱法;第二节 气相色谱法;二、仪器简介;三、定量分析方法;四、顶空分析法;顶空分析法：（又称液上气相色谱分析法） 不经过萃取直接分析的方法 ;;五、衍生化方法 制备衍生化的目的： ①增加被测组分的热稳定性； ②增加被测组分的挥发性； ③减少被测组分在样品制备过程中因吸附性强导致的损失； ④改善组分的层析行为，即制备成衍生物之后易于同其他组分分开； ⑤增加被测组分对有关检测器的灵敏度和选择性。; 第三节 高效液相色谱法;;;;;1.流动相;2.高压泵（输液泵）;4.色谱柱;（2）色谱柱的维护;E、使用预柱（保护柱），主要用以吸附流动相和样品中的杂质，以防分析柱被污染，延长分析柱的寿命。 F、每次停止使用时，都要清洗柱子。长期保存时，柱子中要有合适的溶剂（甲醇或乙腈），避免填料干燥。;5.检测器;三维示意图;（2）荧光检测器（FD） 比紫外检测器有更高的灵敏度和选择性。检测限可达10-10g/ml，只适用于能产生荧光或能转变为荧光衍生物的药物。 （3）电化学检测器（ECD） 包括：电导检测器、极谱检测器、安培检测器（AD） AD：适用于具有氧化还原性质的化合物的检测。检测限可达10-10g/ml。 工作原理：利用组分的氧化还原反应产生电流的变化而进行检测。;（4）蒸发光散射检测器（ELSD）; 质量型检测器，其色谱峰的面积只与峰中所含物质的质量有关。 通用型检测器，能测定所有化合物，与化合物的物理、化学性质无关。 适用于挥发性低于流动相样品的组分。 灵敏度较低，尤其是对紫外吸收的样品。故主要用于测定一些没有紫外吸收的物质，如氨基酸、糖类、磷脂、甾体等。;二、常用色谱分离方法及其应用;液－液分配色谱;RP－HPLC;RP－HPLC（体内药分中应用广泛）;制备高效液相色谱法;2、上样量的影响;3、检测器的选择;（四）直接进样分析法;简单除蛋白后进样：血清、血浆。 蛋白沉淀剂：甲醇、乙腈、三氯醋酸等。;;1、柱切换高效液相色谱法在体内药物分析中的应用;（2）体液直接进样（在线去蛋白）;（4）其他;(五)手性药物的高效液相色谱法 1.概述 ???映异构体：空间结构不能重叠，互为镜像关系的立体异构体。相应的药物称为手性药物。 为什么必须对手性药物进行研究： （1）实际上是不同的化合物，它们与体内的大分子的不同立体结构结合，可产生不同的吸收、分布、代谢和排泄过程，从而导致药物动力学参数的变化。 （2）可能具有不同的药理和毒理作用，甚至产生药效拮抗，也可能其中一个对映体导致药物的不良反应。例：沙利度胺。;2.HPLC分离手性药物的方法;三、定量分析方法;（一）外标法（常用标准曲线法）;应用外标法的基本条件：;（二）内标法;操作过程简述：;2、内标的选择;（2）内标物的选择原则;本章掌握内容