p基因突变和p基因缺失与肝癌的相关性.docVIP

　　p53基因突变和p16基因缺失与肝癌的相关性 【关键词】 ,基因,p53；基因,p16；癌,肝细胞 　　Correlation of p53 gene mutation and p16 gene deletion a 　　【Abstract】AIM: To detect the probability of p53 gene mutation and p16 gene deletion in the plasma of the patients a (HCC) and to explore its correlation ent of HCC and its clinical significance. METHODS: PCR plify p53 gene exon 58 and the immunohistochemistry (SPp16) ployed to determine the deletion of p16 gene. The difference betetastasis utation and deletion. RESULTS: Of 33 cases of HLL 17(51.55%), shoutation of p53; the mutation rate in metastasis group(n=18) etastasis group(n=15). CONCLUSION: There is a correlation betutation and p16 gene deletion .The mutation rate may have the reference value in diagnosis and prognosis prediction of HCC. 　　【Keya, hepatocelluar 　　【摘要】 目的： 检测肝癌患者血浆中p53基因突变和细胞核中p16基因缺失的机率，研究与疾病发生、发展的相关性并探讨其意义. 方法： 实验采用聚合酶联链式反应（PCR）扩增p53基因外显子5~8和免疫组织化学方法SPp16，对其突变和缺失进行分析. 结合临床患者有无肝组织以外转移来对比差异性. 结果： 33例肝癌患者中，有17例结果显示血浆循环核酸p53基因突变；有转移病灶组18例的突变率高于无转移病灶组15例. 结论： 血浆p53基因突变和p16基因缺失与肝癌的发生、与疾病的轻重及病灶转移有相关性，突变机率在临床鉴别诊断和治疗预后中有参考价值. 　　【关键词】 基因，p53；基因，p16；癌，肝细胞 　　0引言 　　在各类疾病中，肝癌以恶性程度高、治疗效果差、病灶易转移和给患者带来极大身心损害而排在前列［1］. 检测血浆中p53和细胞核中p16基因突变机率，对治疗效果判定、康复干预都有参考和使用价值［2］，对肝癌的发生和发展的危险因素评估、早期预防提供实验方法学. 　　1材料和方法 　　1.1材料收集病例35例，患者均经腹部B超、CT或MRI影像学诊断，CEA, AFP多项肿瘤标志物蛋白检测. 有胸腹水患者21例抽取样本进行组织细胞学，4例肝穿刺活检病理学诊断. 21例术后证实为肝癌，12例失去手术机会，2例因病情恶化死亡. 本组研究实为33例，肝癌无转移15例，肝癌合并肺、胃、肠、脑等部位转移癌18例. 男性27例，女性6例，年龄27~69（中位年龄48.27岁）. 自静脉采血分离血浆，不受时间、饮食和治疗影响. 31例正常对照为献血员血浆，男性20例，女性11例，年龄25~55岁（中位年龄42.93岁）.　　1.2方法PCR扩增仪使用美国PE公司智能型热循环仪，引物设计参照序列如下［3］：p53基因外显子5，扩增第5个显子（P56.1和P5.2）序列上游引物顺序5′TTC CTC CTG CAG TAC C3′, 214 bp，上游引物顺序3′GCC CCA GCT GCT CAC CAT3′；p53基因外显子6，扩增第6个显子（P6.1和P6.2）序列上游引物顺序5′CAC TGA TTG CTC TTA GGT CT3′, 144 bp，上游引物顺序5′AGT TGC AAA CCA GAC CTC AGG3′；p53基因外显子7，扩增第7个显子（P7.1和P7.2）序列上游引物顺序5′TCT CCT AGG TTG GCT CTG AC3′, 133 bp，上游引物顺序5′CAA GTG GCT CCT GAC CTG GA3′；p53基因外显子8，扩增第8个显子（P8.1和P8.2）序列上游引物顺序5′CCT ATC CTG AGT ACT GGT AA3′, 166 bp，上游引物顺序3′GTC CTC CTT GCT TAC CTC G3′.　　DNA提取方法