丹参对幼年大鼠癫痫持续状态学习记忆及海马ChAT.docVIP

　　丹参对幼年大鼠癫痫持续状态学习记忆及海马ChAT 【摘要】 目的：观察丹参(RSM)对幼年大鼠癫痫持续状态(SE)学习记忆及海马胆碱乙酰转移酶(ChAT)和乙酰胆碱酯酶(AChE)活性的影响。方法：戊四氮(PTZ)诱导大鼠SE, 丹参(RSM)进行干预,苯巴比妥钠(PB)作为对照，采用Morris水迷宫观察大鼠空间记忆的改变，应用匀浆比色法检测大鼠海马ChAT、AChE活性。结果：Morris水迷宫测试中PTZ组逃避潜伏期延长(Plt;0.05),有效搜索策略百分比降低(Plt;0.01)，平台象限游泳时间百分比降低(Plt;0.01)，海马ChAT、AChE活性降低(Plt;0.01)；RSM组SE后下降的ChAT、AChE活性有所提高，平均潜伏期较PTZ组显著缩短，目标象限停留时间显著高于PTZ组，第1 3天有效搜索策略百分比高于PTZ组，第2 3天高于PB组(Plt;0.05)；PB组仅提高AChE活性，PB组平均潜伏期较PTZ组有缩短趋势，但仅第1天有统计学意义，PB组目标象限停留时间显著高于PTZ组。结论：SE可使幼年大鼠学习记忆受损, ChAT、AChE可能参与这一变化的病理生理过程。丹参用药可能通过修复海马胆碱能系统改善幼年大鼠SE学习记忆损伤。 【关键词】 丹参 癫痫持续状态 学习记忆 胆碱乙酰转移酶 乙酰胆碱酯酶 水迷宫 30% 50%的癫痫患儿伴有不同程度的学习记忆减退、注意力分散及社会适应能力下降等认知功能障碍，直接影响患儿生活质量。大量研究证实，癫痫发作尤以癫痫持续状态(status epilepticus，SE)，不仅可引起暂时性脑功能障碍，且可致严重的器质性脑损伤，进而引起学习记忆及行为异常等严重后果。本实验探讨了丹参(radix salviae miltiorrhizae，RSM)对幼年SE大鼠学习记忆损伤的改善作用。 1 材料与方法 1.1 材料及仪器 ６周龄健康清洁级雄性SD大鼠(东南大学医学院实验动物中心提供)62只,实验起始体质量(110±20) g，12 h光亮/ 黑暗条件、22 25 ℃环境温度,混合喂养。戊四氮(Sigma公司)，丹参注射液（四川升和制药有限公司），苯巴比妥钠注射液(天津金耀氨基酸有限公司)，乙酰胆碱酯酶（AchE）、胆碱乙酰转移酶（ChAT）试剂盒（南京建成生物工程研究所），大鼠Morris水迷宫[1]（中国药科大学）,7530G可见紫外分光光度计(上海分析仪器厂)。 1.2 SE模型制备及实验分组 参照文献方法[2]建立动物模型：戊四氮(pentyleetrazole，PTZ)20 mg·kg-1大鼠腹腔注射,然后每10 min注射10 mg·kg-1,直至达到足够强度和SE持续发作。SE标准:0级，无惊厥发作；Ⅰ级，点头，眨眼，颈动或湿狗样颤抖；Ⅱ级，节律性点头；Ⅲ级，头部抽搐加前肢颤抖；Ⅳ级，第Ⅲ级加后肢站立；Ⅴ级，惊厥致跌倒，全身强直性抽搐。Ⅳ、Ⅴ级发作即为全身性惊厥大发作，持续30 min及以上者为SE。将成功SE模型48只随机分为模型对照组(PTZ组) 24只，苯巴比妥组(PB组)12只，丹参组(RSM组)12只。另设生理盐水对照组(NS组)12只，NS组大鼠腹腔注射同等容量相同次数的生理盐水。 惊厥终止发作后12 h RSM组腹腔注射复方丹参注射液10 g·kg-1，PTZ组、NS组腹腔注射6 ml·kg-1生理盐水，PB组给予PB 60 mg·kg-1腹腔注射，每隔24 h重复给等量药1次，持续7 d。各组动物混合饲养，每日测体质量以调整注射剂量。 1.3 大鼠Morris水迷宫实验 于7 d给药结束后开始进行Morris水迷宫实验,程序包括： (1)定位航行实验(place navigation task)用于测量大鼠对水迷宫学习和记忆的能力。实验历时4.5 d,每天分上、下午2个时段,共9个时段,每时段训练4次。训练时随机选择1个象限(本实验选择Sorris水迷宫实验完毕后直接断头取双侧海马，匀浆比色法测定AChE、ChAT活性。 AChE能使乙酰胆碱（ACh）水解成胆碱和乙酸,胆碱可以与巯基显色剂反应生成黄色化合物TNB(对称三硝基苯，symtrinitrobenzene)，根据颜色深浅进行比色定量，水解产物胆碱的数量可反映胆碱酯酶的活力。组织AChE活力定义为每g组织蛋白在37 ℃保温6 min，水解反应体系中1 μmol·L-1基质为1个活力单位。具体操作按试剂盒说明书进行。 ChAT的测定是以乙酰辅酶A为底物，在ChAT的作用下，反应的生成物和显色剂结合，在324 nm处测定吸光度，以此计算ChAT的活力。酶单位定义为：在pH 7.2条件下，25 30 ℃时每克组织湿质量每分钟转移1 nmol乙酰基给胆碱