哺乳动物转基因技术存在主要问题.pptVIP

四、哺乳动物转基因技术存在的主要问题 1、效率低，成本高 2、外源基因的随机整合和异常表达 3、转基因与动物保护的矛盾 4、转基因动物释放及生物安全 四、哺乳动物转基因技术的发展趋势 1、提高效率，降低成本 2、加强基因顶点郑和技术研究 3、转基因技术的发展将对人类产生深刻的影响 第五节 性别控制技术 Sex control 一、性别控制技术定义和意义 二、性别控制技术的发展概况 三、哺乳动物的性别控制技术 四、性别控制技术的发展前景 一、性别控制的定义和意义 （一）定义：指通过对动物正常生殖过程进行人为干预，使成年雌性动物产出人们期望性别后代的一种繁殖新技术。 受精之前——通过在体外对精子进行干预，使在受精之前便决定后代的性别。 受精之后——通过对胚胎性别鉴定，从而获得所需性别的后代。 （二）性别控制的意义： 1、可使受性别限制的生产性状（如泌乳性状）和受性别影响的生产性状（如肉用,毛用性状等）能获得更大的经济效益。 2、可增强良种选种中的强度和提高育种效率,以获得最大的遗传进展。 3、对人类来说,通过精子性别的选择,可以避免怀孕一个与X相关隐性疾病的婴儿。而与X相关的隐性疾病至今已有370多种。 二、性别控制技术的发展概况 1、1906年Stevens和Wilson， 以昆虫为研究对象，首先发现精子中X染色体,Y染色体。 2、1923年Painter发现人精子中的X染色体,Y染色体。 3、 1959年Welshons和Jacobs等提出Y染色体决定雄性的理论。 4、 1966年Jacobs发现雄性性别决定因素位于Y染色体的短臂 5、1989年Palmer等找到了Y染色体上的性别决定区（sex determing region of the Y chromosome, SRY)。 6、1992年英国的剑桥Mastercalf公司利用分离的精子和体外受精技术得到性控犊牛。 三、哺乳动物的性别控制技术 （一）X、Y精子的分离 1、 X、Y精子的差异DNA含量 DNA含量的差异是由于性染色体的不同所引起，但因测定方法的不同而引起测定值各异。1968年，Schilling用沉淀法分离精子，他发现沉。淀于下层精子的DNA含量高于上层的精子，但DNA含量之差却因测定方法不同而异。用显微光谱法测定时为3.7％，用福尔根法测定时为0.3％，用紫外线分光镜测定时为4.9％。随后的研究表明，这一差值并不是因为X精子、Y精子的不同而引起的，若以单倍体的平均DNA含量的百分比表示，则X精子、Y精子DNA含量差值在所有动物都介于2.5％一4.5％之间。随着流式细胞分类器的问世，人们已成功分离出含DNA多的X精子和含DNA少的Y精子。 2、X精子与Y精子的分离技术 流式细胞分离法： 用流式细胞分离法测量DNA的含量能将含X染色体和Y染色体的精子分开，分离后的精子纯度超过90％。此法分离X精子、Y精子的依据是两条性染色体DNA含量不同。哺乳动物的X精子比Y精子一般大2.9％～4.2％，且X精子带的DNA比Y精子多2.8％～7.5％(猪为3.5％、牛为3.9％、羊为4.2％)。 Johnson(1994)研究表明，X精子与Y精子在染色体的DNA组成上存在最高可达12.5％的差别，这是两者之间的不同，依据这一原理设计出流式细胞分类器。 各种动物X、Y染色体DNA含量差异 （二）早期胚胎的性别鉴定 1、核型分析法：细胞遗传学方法又称为核型分析法。常采用切割胚，一半用于鉴定性别，一半用于冷冻或移植。其基本原理是取一部分细胞，先用秋水仙素处理，再固定染色，检查性染色体，根据人色体中期的谱带差异、Y染色体的大小及形态判断性别，准确绿达100%。但过程复杂，且要求操作人员有丰富的经验。 胚胎性别鉴定 3、免疫学方法 免疫学方法是指利用H-Y抗血清或H-Y单克隆抗体检测胚胎上是否存在雄性特异性H-Y抗原，从而进行胚胎性别鉴定的一种方法。细胞毒性分析法、间接免疫荧光法和囊胚形成抑制法。 1、细胞毒性分析法：在补体（豚鼠血清）存在的情况下，H-Y抗体可以与H-Y阳性雄性胚胎结合，使卵裂球溶解，破坏胚胎的发育。 2、间接免疫荧光法：间接免疫荧光法是以H-Y抗体作为第一抗体，以异硫氰酸荧光素（FLTC）标记的山羊抗鼠r-球蛋白作为第二抗体。将上述两种抗体依次与胚胎共同 培养，雄性胚胎上的抗原先与第一抗体结合，第一抗体再与第二抗体结合，通过洗涤，将没有结合到胚胎上的第二抗体去除，由于第二抗体是荧光标记的，所以在荧光显微镜下观察，有荧光的为雄性胚胎，无荧光的为雌性胚胎。 3、囊胚形成抑制法： H-Y抗体可以可逆性的抑制囊胚的形成。 四、性别控制技术的发展前景 提高精子分离的速度。 提高SRY-PCR的灵敏度和可操作性。 * * 畜牧业：