九抗体酶与酶修饰及活性调.pptVIP

* * 第64页/共93页 第65页/共93页 第66页/共93页 第67页/共93页 2. 乳糖操纵子的调节 在含有Glucose作为碳源的培养基中培养E.coli时，调节基因（i）表达的产物阻遏蛋白结合到操纵基因上，阻止RNA聚合酶对结构基因的转录。与乳糖利用有关的酶不能合成。 （这时合成与乳糖利用有关的酶则是一种浪费）。 在以乳糖为唯一碳源时，乳糖或它的异构体别乳糖（1,6－allolactose）作为效应物，与阻遏蛋白结合，使阻遏蛋白构象发生改变，失去与操纵基因结合的能力,从而丧失抑制活性,解除了对结构基因的转录的抑制。这里乳糖就作为一种诱导物，诱导与乳糖代谢有关酶的表达。 ? 第68页/共93页 大肠杆菌乳糖操纵子模型 调节基因 操纵基因 乳糖结构基因 P LacZ LacY Laca mRNA 阻遏蛋白（有活性） 基 因 关 闭 启动子 O R P LacZ LacY Laca 调节基因 操纵基因 乳糖结构基因 启动子 O R mRNAZ mRNAY mRNAa 阻遏蛋白（无活性） 基 因 表达 mRNA A、乳糖操纵子的结构 B、乳糖酶的诱导 乳糖 阻遏蛋白（有活性） 第69页/共93页 第70页/共93页 第71页/共93页 分解代谢物阻遏 当E.coli在含有Glucose的培养基中生长时，培养基中即使含有乳糖，在Glucose被用完之前，是不会产生与乳糖利用有关的酶的，这种效应称为Glucose效应或分解代谢物阻遏。 第72页/共93页 因为乳糖操纵子的启动子可分为两部分： ▲RNA聚合酶结合部位:富含A·T对，并在它的侧翼富含G·C对 ▲CAP（or CRP）识别/结合部位: 富含G·C对，且是回文结构。 CAP叫做分解代谢物基因活化蛋白（CRP称为cAMP－受体蛋白）它能使G·C对变得不稳定，可促进A·T对分开，从而有利于转录。但CAP的活性受cAMP水平的调节。当cAMP与CAP结合后才能使CAP同启动子的CAP结合部位结合。CAMP的水平受Glucose的某种分解代谢物的影响,该代谢物可以抑制细菌腺苷环化酶的活性，激活磷酸二酯酶的活性，因而可以降低cAMP的浓度.所以当有Glucose存在时,细胞内的cAMP水平显著下降。这样cAMP－CAP的浓度降低，不能促进RNA聚合酶进行转录，也就抑制了酶的诱导合成。 只有当以乳糖作为唯一碳源时，才不会存在Glucose的分解代谢物阻遏的现象。这时，cAMP－CAP的水平升高，在乳糖的诱导下即可合成与乳糖代谢有关的酶。 第73页/共93页 CAP叫做分解代谢物基因活化蛋白(CRP，即cAMP-受体蛋白)它能使G·C对变得不稳定，可促进A·T对分开，从而有利于转录 第74页/共93页 第75页/共93页 乳糖操纵子的降解物阻遏 R LacZ LacY Laca mRNA mRNAZ mRNAY mRNAa 基 因 表达 CAP基因 结构基因 T CGP(CAP) O CAP结合部位 RNA聚合酶 T cAMP -CAP P 葡萄糖 分解代谢产物 腺苷酸环化酶 磷酸二酯酶 ATP cAMP 5-AMP 抑制 激活 葡萄糖降解物与cAMP的关系 cAMP CGP：降解物基因活化蛋白（catabolic gene activation protein） CAP：环腺苷酸受体蛋白（cycilic AMP receptor protein） 降低cAMP浓度 使CAP呈失活状态 第76页/共93页 cAMP－CAP复合物系统是以cAMP为信号的正调节系统。它对所有分解代谢物敏感的操纵子（包括lac和ara-operon）都有控制作用。在这里，乳糖利用酶的表达受到双重控制，即以乳糖为诱导物的“精调”以及以cAMP为信号的“中调“控制。 第77页/共93页 色氨酸操纵子是酶合成阻遏调节的例子 在合成代谢中，催化氨基酸或其他小分子最终产物合成的酶随时都需要，细胞中的这些酶经常在合成,即这些酶的合成经常处于去阻遏的状态。所以，在这类操纵子中，调节基因的产物——阻遏蛋白是不活泼的，不能和操纵基因结合. 当合成途径中的最终产物过量时，它就与阻遏蛋白结合，激活阻遏蛋白。激活后的阻遏蛋白就能结合到操纵基因上，阻止RNA聚合酶对结构基因的转录，与合成反应有关的酶也就不能被合成。最终产物或其衍生物称为辅阻遏物。E.coli和鼠伤寒沙门氏菌的色氨酸操纵子调节即是这种阻遏调节的典型。 第78页/共93页 1.色氨酸操纵子（trp operon）的组织结构 结构基因（A.B.C.D.