植物组织器官培养生产代谢产物2.pptVIP

四 植物细胞与组织器官培养制 备次级代谢产物的比较 第52页/共58页 第53页/共58页 本节回顾与讨论 问题1：与细胞培养途径相比，为什么要进 行组织器官培养制备次级代谢产物？ 问题2：毛状根培养制备次级代谢产物的影 响因素与调控方法？ 第54页/共58页 本节补充阅读文献 第55页/共58页 第1次大作业 查找国内外文献，分析讨论影响紫杉醇 （或长春新碱、紫草宁等）生产的影响因 素与对策。 要求：不少于2000字，综述格式。 时间：2周时间。4月29号上课交。 第56页/共58页 下节课内容 动物细胞培养生物制药 预习思考题： 动物细胞培养生物制药与植物细胞培养生 物制药有哪些不同之处？ 第57页/共58页 谢 谢！ 第58页/共58页 冠瘿组织培养不仅可以生产植物根中产生的次级代 谢产物，而且可以制备植物叶中的代谢产物，国外 利用冠瘿组织培养制备了喹啉生物碱，我国也已经 开展西洋参冠瘿组织培养制备人参皂苷的研究。 Ti质粒另外一个应用：构建转基因植物 第20页/共58页 三 毛状根培养生产药用次级代谢产物 的讨论分析 第21页/共58页 1.长春花碱毛状根培养制备 长春花（Catharanthus roseus (L.) Don）： 夹竹桃科长春花属。 长春花姿态优美，花期长，适合布置花坛、花 境，也可作盆栽观赏。还是一种防治癌症的药 源植物。长春花中含55种生物碱。其中长春碱 和长春新碱对治疗绒癌等恶性神瘤、淋巴肉瘤 及儿童急性白血病等都有一定疗效（长春新碱 抗癌比长春碱高强）。 第22页/共58页 第23页/共58页 第24页/共58页 第25页/共58页 第26页/共58页 2.雪莲花毛状根培养制备黄酮 第27页/共58页 发根农杆菌R1601诱导水母雪莲叶片 21d时达到最大值，为633mg/L 第28页/共58页 氮源总浓度为30mmo1/L时，毛状根 生长量和总黄酮合成量均达到最大， 分别为7.3g/L(DW)和617mg/L; NH4+ /N03-比例为5:25时，毛状根生长 量和总黄酮合成量均达到最大，分别 为8.0g/L(DW)和821mg /L 第29页/共58页 50mg/L葡萄糖效果最好，毛状 根干重和总黄酮合成量分别达到 7.6g/L(DW)和773mg/L; 20mg/L蔗糖和30mg/L葡萄糖组 合时，毛状根生长量达到7.6g/L (DW)，总黄酮合成量达到 850mg/L NOTE：G:葡萄糖；S:蔗糖 第30页/共58页 G A3（赤霉素）对水母雪莲毛状根侧 根的产生有强烈促进作用，GA3浓度为 0.5mg/L时，毛状根生长量达到 9.1g/L(DW)，是基本培养条件下的1.2 倍;总黄酮合成量达到936mg/L。 0.5mg/LGA3和0.5mg/LIBA（3-吲哚丁 酸）组合对毛状根生长和总黄酮合成 最有利，生长量为12.6g/L(DW)，比基 本培养条件时提高了70%;总黄酮合成 量为1287mg/L。 NOTE：NAA(萘乙酸)； IBA(3-吲哚丁 酸)； IAA（吲哚乙酸）； BA（6-苄氨 基嘌呤） 第31页/共58页 第33页/共58页 第34页/共58页 第35页/共58页 结论 上节例子反应器悬浮培养细胞：3.0%黄酮 第36页/共58页 3.讨论 现状： 目前转化成功毛状根的植物有200多种， 但如何使其规模化生产有用的次生代谢产 物报道较少。 课堂讨论题： 你认为植物毛状根培养的最大限制或问 题在哪里？ 第37页/共58页 毛状根生产次级代谢产物的影响因素 当前制约毛状根在药用植物有效成分生产中应用 的主要因素： 毛状根诱导率 毛状根发酵培养技术：一些物理因素(如光强、 温度)和化学因素(如培养基、碳源、氮源、激素 、前体、诱导子等)均会对毛状根的增殖和次生 代谢物质的合成产生影响。 生物反应器 生物合成途径不清楚 第38页/共58页 （1）生物因素 毛状根诱导及高产单克隆根系的筛选： A不同诱导对象 B不同诱导方法 C生长速度、特性（例如：结团性、耐受剪切力） D产物含量 E稳定性 第39页/共58页 （2）化学因素 A碳源： 作为供应毛状根碳源的糖类较多，但对不同的 单糖、双糖如何影响毛状根生长及其产物合成了 解较少。 对于甜菜毛状根，蔗糖能够快速被利用，其次 为麦芽糖；葡萄糖只能被有限地利用；果糖、乳 糖、半乳糖、木糖、甘油既能抑制毛状根生长， 也能抑制甜菜色有合成。 第40页/共58页 B氮源： 常采用的无机氮源主要是硝酸盐和铵。硝酸 盐和铵对毛状根生长及其次生代谢产物合成产生 较为重要的调控作用，因此硝酸盐和铵的比例、 总添加量、添加时间对毛状根的影响值得研究。 第41页/共58页 C激素： 对根的生长产生影响，激素也影