生物化学教程蛋白质性质.pptxVIP

（一）蛋白质的两性解离和等电点（pI）１、两性解离２、蛋白质的等电点（pI）３、电泳１、两性游离 NH3 + ∕ Pr ＼ COOH NH3+ ∕ Pr ＼ COO- NH3 ∕ Pr ＼ COO- OH-OH-H+H+阳离子兼性离子阴离子（pH＜PI） （pH=PI） （pH＞PI）２、蛋白质的等电点（pI） 当溶液处于某一pH值，蛋白质分子所带正、负电荷相等，净电荷为零，呈兼性离子状态，此时溶液的pH值称为该蛋白质的等电点（pI）。 不同的蛋白质，其等电点（pI）不同。pI是蛋白质的特征性常数。利用蛋白质两性电离的性质，可通过电泳、离子交换层析、等电聚焦等技术分离蛋白质。 几种蛋白质的等电点（pI）蛋白质名称 来源pI血清蛋白 人血4.64肌球蛋白 肌肉7.0 胃蛋白酶 猪胃2.8~3.0胰蛋白酶 胰液5.0卵清蛋白 鸡蛋4.8~4.9白明胶 动物皮4.8３、电泳-+ 带电颗粒向与其电荷相反的电极方向移动。 意义：用于蛋白质的分离、纯化鉴定和分子量的测定。 血清蛋白电泳图谱：α1α2Β清蛋白γ球蛋白电泳 蛋白质在等电点pH条件下，不发生电泳现象。利用蛋白质的电泳现象，可以将蛋白质进行分离纯化。电泳方法：自由界面电泳纸电泳凝胶电泳区带电泳圆盘电泳平板电泳（二）蛋白质的胶体性质与蛋白质的沉淀1、蛋白质是高分子化合物，分子量多在1万~100万之间。2、球状蛋白质的颗粒大小达1~100 nm范围，故蛋白质有胶体性质。蛋白质水溶液是一种比较稳定的亲水胶体。3、蛋白质分子大，不能透过半透膜。4、蛋白质在一定的溶剂中，经超速离心，可发生沉降。蛋白质的胶体性质颗粒大小：在1～100nm之间。属胶体。因此溶于水，成为亲水胶体。 稳定亲水胶体的因素： 水化膜 表面电荷 不通透性：半透膜 透析的原理： 透析 将蛋白质溶液(不纯)放入透析袋中，放在流水中（纯水），让低分子杂质（如盐类）透过半透膜扩散入水内，蛋白质则留在袋中，分离纯化蛋白质。半透膜阻留pr分子，而让小的溶质分子和水通过，以达到除去蛋白质溶液中小分子（盐、低分子酸等）。沉降作用1、沉降概念： 蛋白质溶液经高速离心分离时，由于比重关系，蛋白质分子趋于下沉，离心管底部的蛋白质浓度增高。2、沉降速率： 在离心时，蛋白质分子在单位时间t（以秒计）内下沉的距离x（以cm计）。以v表示。 v= dx/dt沉降作用1、沉降概念：2、沉降速率： v= dx/dt3、沉降常数（沉降系数，S） 单位引力场沉降分子下沉的速率。 S= v /ω2x v：沉降速率（dx/dt）可以从实验测得。ω：离心机转子每秒钟的角速度，以弧度/秒计。（即2Л ×转子每秒钟的转速） x：蛋白质界面中点与转子中心之间的距离（以cm计）。Svedberg单位的定义：单位引力场沉降分子下沉的速率。取 1 ×10-13秒为一个Svedberg单位。例：①牛血清清蛋白的沉降常数为:4.4×10-13用Svedberg单位则为: 4.4 S②原核细胞核糖体的沉降常数为:70×10-13用Svedberg单位则为: 70 S蛋白质的沉淀1、概念：蛋白质分子发生凝聚，从溶液中析出的现象。2、蛋白质水溶液是一种比较稳定的亲水胶体。 稳定因素：水化膜 电荷　 破坏稳定因素，就可使蛋白质颗粒凝聚而沉淀。3、沉淀方法： ①盐析法②有机溶剂沉淀③重金属盐沉淀　条件:pH＞pI (Pr- M+)④某些酸类沉淀　条件： pH＜pI ( Pr+ X-) ⑤加热变性沉淀①盐析法加高浓度中性盐使蛋白质沉淀析出。NaCl、 （NH4）2SO4、NaSO4等。破坏蛋白质胶体周围的水化膜，中和了蛋白质分子的电荷，使蛋白质沉淀而析出。分段盐析：调节盐浓度，可使混合蛋白质溶液中的几种蛋白质分段析出。分离制备蛋白质的常用方法。②有机溶剂沉淀有机溶剂：乙醇、丙酮等。破坏蛋白质颗粒表面的水化膜。pH=pI时，可加速蛋白质沉淀。低温（0℃∽4 ℃）。 NH2Pr COO-M+ NH3+Pr COO- NH2Pr COO-OH-M+③重金属盐沉淀　氯化高汞、硝酸银、醋酸铅、三氯化铁等。反应条件: pH＞pI不溶性蛋白盐M+： 重金属离子 NH3+X-Pr COOH NH3+Pr COO- NH3+Pr COOHH+X-④某些酸类沉淀　苦味酸、单宁酸、钨酸、鞣酸、三氯乙酸等。反应条件: pHpI不溶性蛋白盐X- ：酸根一些常见的蛋白质沉淀剂１、盐：破坏水膜，中和电荷　盐溶、盐析的概念２、有机溶剂