pai1在抵抗素促进小鼠静脉血栓形成中的作用-role of pai 1 in resistin promoting venous thrombosis in mice.docxVIP

学位论文原创性声明本论文是我个人在导师指导下进行的工作研究及取得的研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或其它机构已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在论文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律责任由本人承担。作者签名：日期：年月日学位论文使用授权声明本人授权汕头大学保存本学位论文的电子和纸质文档，允许论文被查阅和借阅；学校可将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存和汇编论文；学校可以向国家有关部门或机构送交论文并授权其保存、借阅或上网公布本学位论文的全部或部分内容。对于保密的论文，按照保密的有关规定和程序处理。作者签名：导师签名：日期：年月日日期：年月日学位论文知识产权声明本人郑重声明：我所提交答辩的学位论文，是本人在导师指导下完成的成果，该成果属于汕头大学医学院，受国家知识产权法保护。本人在毕业离校前会将有关的研究资料和结果全部上交导师，离校后使用与学位论文相关的数据资料参加学术会议、公开报告、发表论文和申请基金等，须征得导师及导师所在单位的同意。不得擅自对外披露本论文尚未公开的研究成果。本人完全意识到本声明的法律责任由本人承担。注：保密的学位论文在解密后适用本声明。研究生签名：日期：年月日导师签名：日期：年月日摘要背景及目的：代谢综合征（Metabolicsyndrome，Mets）的主要特点是胰岛素抵抗、高血压、中心型肥胖及高脂血症，其发病率逐年升高且发病年龄趋于年轻化；代谢综合征患者发生血栓栓塞性疾病及相关并发症的概率明显高于正常人群，但其具体发病机制尚未明确。代谢综合征患者体内抵抗素（Resistin，Re）水平明显升高。本课题组前期在体实验发现肥胖小鼠体内抵抗素水平升高，升高的抵抗素可促进小鼠静脉血栓的形成，同时肥胖小鼠体内纤溶酶原激活剂抑制物-1（Plasminogenactivatorinhibitor1，PAI-1）水平也升高。紧接着本课题组前期体外实验发现抵抗素能促进内皮细胞PAI-1表达水平的升高。因此，综合体内外实验，我们推测抵抗素促进血栓形成的过程可能与PAI-1有一定的关系。本研究通过PAI-1单克隆抗体（PAI-1Ab）抑制PAI-1蛋白活性，观察外源性抵抗素作用后血栓的变化情况，直接验证PAI-1在抵抗素促进小鼠静脉血栓形成中的作用。方法：购买同窝出生的8-10周大小SPF级C57BL/6雄性小鼠40只，以普通饲料饲养2周后随机分为四组，分别予以注射不同药物；分组及注药方法如下：1）盐水组：腹腔注射生理盐水0.1ml/30g，共16天；2）盐水+PAI-1Ab组：腹腔注射生理盐水0.1ml/30g，共14天，然后腹腔注射PAI-1Ab5μg/g共2天；3）抵抗素组：腹腔注射抵抗素0.033μg/g/d，共14天，然后腹腔注射生理盐水共2天；4）抵抗素+PAI-1Ab组：腹腔注射抵抗素0.033μg/g/d，共14天，然后腹腔注射PAI-1Ab5μg/g共2天。并设置假手术对照组。然后以下腔静脉结扎方法构建下腔静脉血栓模型，48小时后检测以下指标：1）下腔静脉血栓重量（mg）及长度（cm）；2）ELISA法检测小鼠血浆中抵抗素及PAI-1蛋白水平；3）用RT-PCR检测下腔静脉PAI-1mRNA表达水平；4）用HE染色观察血栓内纤维蛋白含量。结果：（1）抵抗素组血栓重量及长度明显大于盐水组（P＜0.01）；抵抗素+PAI-1Ab组血栓重量及长度明显小于抵抗素组（P＜0.01）。（2）抵抗素组血浆抵抗素浓度明显高于盐水组（P＜0.01），抵抗素+PAI-1Ab组血浆抵抗素水平高于盐水+PAI-1Ab组（P＜0.01）。（3）抵抗素组血浆PAI-1蛋白水平高于盐水组（P＜0.01）；抵抗素+PAI-1Ab组血浆PAI-1蛋白水平低于抵抗素组（P＜0.01）。（4）抵抗素组小鼠下腔静脉PAI-1mRNA表达水平高于盐水组（P＜0.01），抵抗素+PAI-1Ab组小鼠下腔静脉PAI-1mRNA表达水平高于盐水+PAI-1Ab组（P＜0.01）。（5）抵抗素组小鼠下腔静脉血栓内纤维蛋白含量明显多于盐水组，抵抗素+PAI-1Ab组小鼠下腔静脉血栓内纤维蛋白含量明显少于抵抗素组,盐水+PAI-1Ab组血栓纤维蛋白含量少于盐水组。结论：抵抗素可增加小鼠深静脉血栓重量及长度，促进血栓形成。抵抗素可升高小鼠下腔静脉内皮PAI-1mRNA及血浆PAI-1蛋白水平。抑制PAI-1可减弱抵抗素的促进深静脉血栓形成作用，提示抵抗素促进血栓形成部分是通过PAI-1发挥作用。关键词：代谢综合征；抵抗素；纤溶酶原激活物抑制物-1（PAI-1）；纤维蛋白溶解；血栓形成ABSTRACTBackgroundandobjective