pcdh10通过下调wntβcatenin信号通路抑制多发性骨髓瘤细胞增殖及其机制-pcd h10 inhibits multiple myeloma cell proliferation and its mechanism by down-regulating wnt β catenin signaling pathway.docxVIP

下载本文档

4
0
约3.98万字
约 46页
2018-06-01 发布于上海
举报
版权申诉

pcdh10通过下调wntβcatenin信号通路抑制多发性骨髓瘤细胞增殖及其机制-pcd h10 inhibits multiple myeloma cell proliferation and its mechanism by down-regulating wnt β catenin signaling pathway.docx

1、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击这里二次下载。
3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
4、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
5、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
6、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
7、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次，网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档

pcdh10通过下调wntβcatenin信号通路抑制多发性骨髓瘤细胞增殖及其机制-pcd h10 inhibits multiple myeloma cell proliferation and its mechanism by down-regulating wnt β catenin signaling pathway

英汉缩略语名词对照英文缩写bp英文全称Basepair中文全称碱基对BSABovineserumalbumin牛血清白蛋白CCK-8CellCountingAssayKit-8细胞计数试剂盒FBSFetalBovineSerum胎牛血清ECLenhancedchemiluminescence增强化学发光FCMFlowCytometry流式细胞术IFImmunofluorescence免疫荧光mRNAMessengerRibonucleicAcid信使核糖核酸MMMultipleMyeloma多发性骨髓瘤PCDH10PBSProtocadherin-10PhosphateBufferSolution原钙粘蛋白-10磷酸盐缓冲液PMSFPhenylmethylsulfonylfluoride苯甲基磺酰氟PVDFPolyvinylidencdifluoride聚偏氟乙烯PIPropidiumIodide碘化丙啶RT-PCRReversetranscriptionPolymeraseChainReactionSDSSodiumdodecylsulfatePolyacrylamidegelelectrophoresisTEMEDN,N,N,N-tetramethylethylenediamineTris2-Amino-2-hydroxymethyl-1,3-propanediol逆转录聚合酶链式反应十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳四甲基乙二胺三羟甲基氨基甲烷TBSTTBSwithTween20含有吐温20的TBSWBWesternBlotting免疫蛋白印迹法1PCDH10通过下调Wnt/β-catenin信号通路抑制多发性骨髓瘤细胞增殖及其机制摘要目的探讨PCDH10是否通过调控Wnt/β-catenin信号通路抑制MM细胞增殖及其相关机制。方法采用脂质体转染法将空载体pcDNA3.1(+)TP53质粒和pcDNA3.1(+)PCDH10质粒分别转染至RPMI8226、KM3细胞。实验分为对照组、空载体组、转染组。采用RT-PCR和Westernblot检测三组细胞PCDH10表达。RT-PCR检测不同浓度（0、5、10、15及20μM/ml）的Licl处理48h后细胞内β-catenin的表达，选取最佳浓度Licl分别作用于各组细胞；应用CCK-8检测细胞增殖能力；流式检测细胞周期；质粒双荧光素酶报告基因检测系统分析PCDH10对LEF/TCF活性的影响；实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测β-catenin、c-Myc、Cyclind1、BCL-9基因mRNA表达水平；Westernblot检测β-catenin、c-Myc、Cyclind1、GSK-3β、pGSK-3β、AKT总蛋白水平及细胞核内β-catenin、BCL-9蛋白表达；免疫荧光观察PCDH10对β-catenin核转位的影响。结果①PCDH10基因转染后在RPMI8226、KM3细胞中获得稳定表达；②CCK-8结果发现转染组细胞增殖能力显著受抑(P0.05)；③流式结果显示PCDH10将细胞周期阻滞于G1期(P0.05)；④荧光素酶活性分析显示PCDH10显著抑制LEF/TCF基因活性(P0.05)；⑤qRT-PCR结果显示转染组细胞中c-Myc、Cyclind1、BCL-9mRNA水平下降(P0.05)，β-cateninmRNA水平无明显下降(P0.05)；⑥Westernblot结果显示，转染组细胞中β-catenin、c-Myc、Cyclind1、pGSK-3β、AKT总蛋白表达降低，而GSK-3β蛋白表达增加，同时细胞核内β-catenin、BCL-9蛋白表达明显下调；⑦免疫荧光观察到转染组细胞β-catenin荧光强度减弱，核内分布减少；⑧RT-PCR检测发现20μM/ml的Licl为KM3细胞最佳作用浓度，RPMI8226细胞的最佳作用浓度为15μM/ml；⑨经Licl处理后，与对照组、空载体组比较，转染组细胞增殖能力及β-catenin、c-Myc、Cyclind1、pGSK-3β蛋白表达仍受到抑制(P0.05)。结论①PCDH10能将细胞周期阻滞于G1期，降低MM细胞增殖能力；②PCDH102通过下调Wnt/β-catenin信号通路抑制MM细胞增殖；③PCDH10下调Wnt/β-catenin信号通路的机制与抑制LEF/TCF活性及其辅助因子BCL-9的表达有关；④PCDH10可通过下调AKT的表达增加GSK-3β蛋白水平，减少胞浆游离β-catenin，抑制β-catenin入核，进一步降低Wnt/β-catenin通路活性。[关键词]PCDH10，Wnt/β-catenin信号通路，多发性骨髓瘤，细胞增殖3PCDH10INHIBIT