pdgfbb促进卵巢癌细胞腹腔播散的机制研究-mechanism of pdgf bb promoting peritoneal dissemination of ovarian cancer cells.docxVIP

独创性声明本人声明 所呈交 的学位 论文是 我个人 在导师 指导下 进行的 研究工 作及取 得的 研究成果。尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人 或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已 在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：周晓水 日期：2015 年 03 月 30 日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留 并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授 权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采 用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本论文属于保密□，在年解密后适用本授权书。 不保密□。（请在以上方框内打“√”）学位论文作者签名：周晓水指导教师签名：王常玉日期：2015 年 03 月 30 日日期：2015 年 03 月 30 日目录第一部分 ······················· 1中文摘要 ······················· 1英文摘要 ······················· 3正文 ······················· 5前言 ······················· 5材料与方法 ···················· 7实验结果 ····················15讨论 ······················23参考文献 ····················24第二部分 ······················29综述 ······················29参考文献 ····················35致谢 ······················39第一部分PDGF-BB 活化间皮细胞，促进卵巢癌细胞腹腔播散 摘要目的研究 platelet-derived growth factor-BB (PDGF-BB) 是否能够使间皮细胞 （mesothelial cell）活化，即发生间皮间质化（mesothelial–mesenchymal transition，MMT）, 进而增强卵巢癌细胞的腹腔黏附能力。方法 收集 2014 年华中科技大学同济医学院附属同济医院妇科肿瘤科室非癌患者的良 性腹腔冲洗液和卵巢癌患者腹水，分离出间皮细胞进行原代培养。良性腹腔冲洗液分 出的间皮细胞本文用 mc 表示，卵巢癌腹水分离出的间皮细胞用 MC 表示。通过上皮属 性标志细胞角蛋白（cytokeratins7，CK7）和间质属性标志波形蛋白（vimentin,Vim）、α- 平滑肌蛋白（α-SMA）的细胞免疫荧光对分离的间皮细胞鉴定以供后续试验。观察比 较培养后良性腹腔冲洗液和恶性腹水来源的间皮细胞特征的不同，通过 Western Blot 验证 MMT 相关指标的变化，如：血小板源性生长因子受体 β 多肽（platelet—derived growth factor receptor –β，PDGFR-β）、E-cad、Vim、α-SMA、fibronectin 、 collagen I；利用 transwell 小室比较良性腹腔冲洗液和恶性腹水来源的间皮细胞的侵袭能力；分别收集 10 例良性腹腔冲洗液和恶性卵巢癌腹水，用细胞因子芯片去验证两者间所含可溶性因 子的不同，用 ELISA 比较 PDGF-BB 分别在腹水和良性腹腔冲洗液中的浓度差异，并 且用 KMPLOT 预测 PDGFR 与卵巢癌患者的预后关联性；PDGF-BB (50ng/ml)分别处理 间皮细胞 mc1，mc2，mc3 24 小时后利用 transwell 小室验证间皮细胞自身侵袭能力的 变化和对卵巢癌细胞系 SKOV3 的趋化能力的变化；体外黏附实验验证 PDGF-BB 处理 间皮细胞后肿瘤细胞球体对其黏附能力和后续细胞球体的铺展能力的变化。SKOV3 的 条件培养基（SK-CM）处理间皮细胞是否可得到与 PDGF-BB 同样的功效，同时应用 PDGFR 阻断剂伊马替尼（Imatinib，20μ mol/L）处理间皮细胞 24 小时后，验证是否能 逆转上述生物学效应。结果腹腔冲洗液中可分离出间皮细胞，细胞免疫荧光显示该间皮细胞表达 CK7、Vim， 不表达 α-SMA。MC 较 mc 而言，细胞形态明显的长梭样，形态类似肌成纤维细胞； Western Blot 试验结果显示 MC 比 mc 的 E-cad 上皮性蛋白表达降低，相反，Vim、α-SMA、fibronectin 、 collagen I 和 PDGFR-β 肌成纤维细胞相关