pd兔模型脑组织中nos的变化以及nos抑制剂lnna对pd模型的神经保护作用-changes of nos in brain tissue of pd rabbit model and neuroprotective effect of nos inhibitor lnna on pd model.docxVIP

中文摘要本试验用兔作为试验动物成功制备了帕金森症(PD)模型，然后分别用美多巴和NOS抑制剂L-NNA对成功模型兔进行比较治疗。通过测定各组兔血清和额叶、黑质和纹状体内NO含量、NOS活性以及各脑组织内NOS阳性神经元的表达的变化来探讨PD发病机理与NO的关系和NOS抑制剂对其主要病变部位NO、NOS和多巴胺能神经元的影响。运用脑立体定位及微量注射技术将6-OHDA注射入右侧纹状体靶点内，制备帕金森症兔模型，并通过行为学及免疫组织化学方法对模型进行检测。行为学检测结果显示，本试验制备的PD兔模型到第6周时有80%的兔达到成功模型标准。免疫组织化学检测结果显示，TH免疫组化染色可见正常对照组、假手术组及模型组未损侧黑质内有胞浆浓染、突起明显的TH免疫反应阳性神经元分布，神经元数量较多，轴突长度较长，且三者差异不显著；而模型组损毁侧黑质内TH免疫反应阳性神经元与上述三者相比，数目明显减少，残存的细胞染色较浅，胞体轮廓和突起均不清晰，轴突长度明显变短,进一步验证了模型的可靠性。利用硝酸还原酶法和生物化学检测方法分别检测各组兔血清及额叶、黑质、纹状体内的NO含量及各脑组织内NOS的活性变化。结果显示：模型对照组和美多巴组的血清NO浓度和各脑组织内NO含量都显著高于正常对照和假手术对照组；而L-NNA组上述指标则与正常对照及假手术组无显著性差异。NOS活性检测结果显示，各组兔额叶、黑质、纹状体内TNOS活性强弱顺序均为：模型组对照组损毁侧美多巴组损毁侧模型组未损毁侧L-NNA损毁侧正常及假手术对照组。各组兔额叶内iNOS和cNOS、纹状体内cNOS、中脑（含黑质）内iNOS的活性强弱顺序都与TNOS基本一致。而iNOS在各组纹状体内活性都很弱，只有模型组损毁侧与对照组间存在显著差异；中脑黑质部位cNOS的活性却很低，且各组之间也无显著差异。利用SABC免疫组织化学法，在光镜下对各组兔黑质TH和额叶、黑质、纹状体内nNOS、iNOS阳性神经元的形态结构及分布进行观测。结果显示：各组兔额叶内nNOS和iNOS阳性神经元、黑质内iNOS阳性神经元、纹状体内nNOS阳性神经元的表达与TH阳性神经元在各组兔黑质内数量的变化趋势相反，L-NNA组NOS阳性神经元的表达与美多巴组相比更接近正常对照组和假手术对照组。各组兔黑质内未见nNOS阳性神经元表达，纹状体内未见iNOS阳性神经元表达。结果表明：模型组损毁侧黑质内多巴胺能神经元的缺失死亡伴随着额叶、黑质和纹状体内NO含量的增加，额叶内nNOS和iNOS、黑质内iNOS、纹状体内nNOS表达的增强，提示NO参与了PD模型的发病过程，而且在不同的脑组织内发挥主要作用的为不同类型的NOS神经元。NOS抑制剂L-NNA对黑质多巴胺能神经元具有良好的保护作用。鉴于模型与PD病人的相似性，推测NO可能参与了PD症的发病机制，NOS抑制剂可以作为PD药物开发的新思路。关键词：兔；帕金森病；模型；一氧化氮合酶；L-硝基-精氨酸ThechangeofNOSinthebraintissueofPDrabbitmodelandtheNeuroprotectionroleofNOSinhibitorL-NNAinPDrabbitmodelAbstractTheanimalmodelofParkinson’sdiseasewasestablishedwithrabbitsinthispaper,andthenMadoparandNOSinhibitorL-NNAwererespectivelyusedtotreatthesuccessfulanimalmodel.TostudytherelationshipbetweenthepathologicmechanismofPDandNO,andtheeffectofNOSinhibitorL-NNAonNO,NOSanddopaminergicneuroninthemaindiseasedregion,thecontentofNO,theactivityofNOSandtheexpressionofNOSpositiveneuronsinfrontallobe,SubstantiaNigra,CorpusStriatumweredeterminedineverygroupofrabbits.ThemethodofmodelingParkinsondisease(PD)byinjecting6-hydroxydopamine(6-OHDA)intorightsideofrabbitcorpusstriatumwithcerebralstereotaxisandmicroinjectiontechniquewasusedinthisstudy,andthenbehaviortest