pi3kaktmtor信号通路与鼻咽癌cne1 lmp1细胞原发吉非替尼耐药关系的研究-relationship between pi 3 kakmtor signaling pathway and primary gefitinib resistance in nasopharyngeal carcinoma cne 1 lm p1 cells.docxVIP

独创性声明本人郑重声明，本学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研 究成果的总结。尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其 他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集 体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本人将承担本声明引起的一切 法律后果。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有 权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和 借阅。本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据 库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本论文属于保密□ ，在年解密后适用本授权书。不保密□。（请在以上方框内打“√” ）学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日目 录中文摘要 1Abstract3前 言 5正 文 7材料和方法 7实验结果 14讨 论 22参考文献 25文献综述 28参考文献 35致 谢 38PI3K/AKT/mTOR 信号通路与鼻咽癌 CNE1-LMP1 细胞原发吉非替尼耐药关系的研究硕士研究生： 冉俊导师： 胡国清 教授 华中科技大学同济医学院附属同济医院肿瘤中心研究所 中文摘要背景与目的: 既往的研究显示，EGFR 在多种肿瘤中存在高表达，表皮生长因子 受体酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKIs）对包括非小细胞肺癌在内的多种 EGFR 高表达 的肿瘤均有效，而 EGFR-TKI 吉非替尼对进展的和复发的鼻咽癌疗效欠佳。EGFR-TKI 和 mTOR 抑制剂联合应用已在非小细胞肺癌(NSCLCs)、头颈部鳞癌(SCCHN)、恶性 胶质廇(GBM)、胰腺癌及前列腺癌等肿瘤中证实有协同作用。本实验旨在初步探讨 EGFR-TKI 吉 非 替 尼 (gefitinib,Iressa) 联 合 mTOR 抑 制 剂 依 维 莫 司 (everolimus,RAD001)对鼻咽癌细胞株 CNE1-LMP1 的作用效果及上述效应的机制分 析，研究 PI3K/AKT/mTOR 信号通路与鼻咽癌吉非替尼的原发性耐药之间是否具有 相关性。方法: 吉非替尼、依维莫司单药或联合用药作用于人鼻咽癌细胞株 CNE1-LMP1 后，采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法分别检测各组处理对细胞增殖的影响；采用流式细 胞仪检测对单药或联合用药对 CNE1-LMP1 细胞凋亡和细胞周期分布的影响；采用 Western blot 检测单药或联合用药后 CNE1-LMP1 细胞 PI3K/AKT/mTOR 信号通路上， 磷酸化蛋白激酶 B(phosphorylated Akt,p-Akt)、磷酸化核糖体 40S 小亚基 S6K 蛋白 激酶(p-p70S6K)在蛋白水平表达的影响。结果: 吉非替尼或依维莫司单独作用后,均可以明显的抑制 CNE1-LMP1 细胞的 增殖，可以诱导 CNE1-LMP1 细胞发生凋亡，且这种作用呈现出剂量依赖性。吉非替 尼单药作用可以明显降低 CNE1-LMP1 细胞 p-Akt 蛋白的表达水平，依维莫司单药作 用可以明显降低 CNE1-LMP1 细胞 p-p70S6K 蛋白的表达水平。吉非替尼和依维莫司联合作用后，对 CNE1-LMP1 细胞增殖、凋亡以及 p-Akt、p-p70S6K 蛋白的表达的影响，表现 出较单一 用药更 为显著 的作用 。 吉非替尼 单药和联 合用药 均能够 引起CNE1-LMP1 细胞 G0/G1 期阻滞，且联合用药的促进作用更强。 结论：吉非替尼和依维莫司两种药物之间具有良好的协同作用，其可能机制是能够共同抑制 CNE1-LMP1 细胞增殖、凋亡、降低增殖相关信号蛋白的表达水平；初步 证实 PI3K/AKT/mTOR 信号通路与鼻咽癌 CNE1-LMP1 细胞吉非替尼原发耐药有着一 定的相关性；提示联合用药可能在临床治疗鼻咽癌中具有一定的应用潜力。关键词: 鼻咽癌，CNE1-LMP1 细胞，吉非替尼，依维莫司，细胞增殖，细胞凋 亡，细胞周期，磷脂酰肌醇(PI3K)，哺乳雷帕霉素靶蛋白(mTOR)，p-Akt，p-p70S6KStudy the relationship between PI3K/AKT/mTOR signaling pathways and the intrinsic resistance of nasopharyngealcarcinoma CNE1-LMP1 cells to GefitinibCandidate: Ran Jun Supervisor: Prof. Hu GuoqingCancer center research Institute of