pkcαnrf2ho1信号通路在兔内毒素休克急性肺损伤中的作用-role of pkc α nrf 2 ho 1 signal pathway in acute lung injury caused by endotoxic shock in rabbits.docxVIP

学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取 得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不 包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志 对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定， 即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用 影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有 关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。本论文属于保密，在年解密后适用本授权书。不保密。（请在相对应的方框内打“√” ）学位论文作者签名：日期：年月日导师签名 ：日期：年月日中文摘要内毒素休克所导致的肺组织损伤，治疗过程棘手，发病机制复杂而且不明 确，由其引发的ALI/ARDS目前仍是危重病领域研究的难点和热点。剖析这一庞 杂的发病机制，对改善其预后和降低死亡率有着十分重要的临床意义。我们前期研究的结果表明，血红素氧合酶-1(HO-1) 被认为是对抗氧化应激、 炎性刺激等适应性的细胞反应, HO-1 代谢产物中的胆红素具有强大抗炎、抗氧 化性，有肺脏保护作用，但是有关诱导 HO-1 表达上调的机制尚不清楚[1-5]，因 此明确其诱导表达机制，对内毒素休克肺损伤的防治具有十分重要的指导意义。 转录因子 NF-E2 相关因子 2（Nrf2）具有抗炎、抗氧化，抑制细胞凋亡等多重生 物活性，Nrf2 是一种重要转录因子，在提供细胞保护、维系细胞生存方面具有 重要意义，属于基本亮氨酸拉链的一个子集，其广泛存在于机体组织细胞中。 与抗氧化反应序列元件(ARE)共同构成 Keapl-Nrf2/ARE 通路[6]；而蛋白激酶 C（PKC）为苏氨酸/丝氨酸蛋白激酶，是一种磷脂、Ca2+所依赖的蛋白激酶，参 与细胞的分化、增殖、凋亡、迁移、细胞支架组构等，并承担着跨膜信号传递 等重要作用，其机制是诱导了多种蛋白质上的 Thr/Ser 磷酸化。PKC 信号转导通 路是高度保守三级激酶级联传递信号通路，发生低血压性休克时，启动该通路， 可减少血液动力学的大幅波动，维持生命体征相对平稳。PKCα 属传统或者说是 典型的 PKC（classicalor conventional PKC,CPKC），隶属于 A 组中一个亚类，其 激活的标志通常认为就是 PKCα 发生了转位。它可以活化 Nrf2，促使其移入细 胞核，从而发挥上调 HO-1 表达的作用[9]。目前，关于 PKCα -Nrf2-HO-1 在内毒 素休克急性肺损伤作用的研究尚未见相关报道。本研究拟通过建立内毒素休克 肺损伤模型并应用相关通路阻断剂及诱导剂来评价 PKCα -Nrf2-HO-1 通路在兔 内毒素休克急性肺损伤中的作用，为日后相关研究提供理论依据。目的本研究拟探讨 PKCα-Nrf2-HO-1 通路在兔内毒素休克诱发急性肺损 伤中的作用。方法健康清洁级新西兰大白兔 70 只，雌雄不拘，2 月龄，体重 2.0~2.5 kg， 采用随机数字表法，随机分为 7 组（n=10）：空白对照组（C 组）、模型组（M 组）、PKC 阻断剂白屈菜赤碱+模型组（CHE+M 组）、PKC 诱导剂豆蔻酸佛波酰 乙酯+模型组（PMA+M 组）、PKC 阻断剂白屈菜赤碱组(CHE 组)和 PKC 诱导剂 豆蔻酸佛波酰乙酯组（PMA 组）、溶媒二甲亚砜组（DMSO 组）。CHE +M 组、ICHE 组腹腔注射白屈菜赤碱（Chelerythrine，CHE）8mg/kg(溶于 0.5ml DMSO),PMA+M 和 PMA 组腹腔注射豆蔻酸佛波酰乙酯（Phorbol-12-myristate-13-acetate， PMA）0.02 mg/kg(溶于 0.5ml DMSO)，C 组腹腔注射生理盐水 0.5ml,其余各组以 同样方式注射 DMSO 0.5 ml。M 组、CHE +M 组和 PMA +M 组 30min 后耳缘静 脉注射 LPS 5 mg/kg（溶于 2 ml 生理盐水）制备内毒素休克急性肺损伤模型，其 余各组注射生理盐水 2ml。耳缘静脉注射 LPS 后两小时后，右颈总动脉置管所 监测的各组平均动脉压变化至原始值的 75%及以下，即可认为模型建立成功。 在脂多糖注射到达 6 小时后处死各组的实验兔，采集右颈总动脉血样 3.5 ml 并 取肺组织。留取肺组织行病理学观察并进行病理评分，测定肺组织 W/D 比率、 SOD 活性及 MDA 含量，检测血清 TNF-α 和 IL-10 浓度以及肺组织 Nrf2 mRNA、 HO-1 mRNA、Nrf2 总蛋白、Nrf