rfrp3gpr147在黑线仓鼠的差异表达-differential expression of rfrp 3ggp r 147 in hamster.docxVIP

摘 要动物的季节性繁殖是指动物只在特定季节进行繁殖活动的现象。季节性繁殖动物通过 整合光信号（光周期）与其它环境因子（食物丰度、温度等）来调控它们的繁殖活动。动 物的生理状态随着外部环境信号的改变而改变。为了获得最大的繁殖成功率，季节性繁殖 动物只在一年最适宜的某个时间段进行繁殖活动，以保证母体和后代最大的存活率。这也 就造成了动物种群数量在季节间的波动现象。黑线仓鼠（Cricetulus barabensis）是一种典型的季节性繁殖动物，在我国华北地区有 广泛分布。它的繁殖活动受到外界光周期、温度、食物等因素的调控，黑线仓鼠在春、秋 季节出现繁殖高峰期，季节间种群数量出现较大的波动。黑线仓鼠也是华北地区一主要的 农业害鼠，喜食作物种子；在作物发芽生长期，取食作物的茎和嫩叶，这样对农作物生产 造成较大的损害，造成作物产量大大减少。华北平原主要是种植农作物，粮食作物主要为 小麦和玉米，黑线仓鼠的大量繁殖，除了对该地区的农作物生产造成损失外，黑线仓鼠自 身也极易携带可传播的病毒，对人们的健康生活也造成了一定程度的威胁。因此研究其繁 殖机制、控制黑线仓鼠的繁殖活动，显得尤为重要。本研究以从山东省临沂市捕获的野生黑线仓鼠为实验材料，从与黑线仓鼠繁殖活动密 切相关的繁殖基因入手，通过对黑线仓鼠进行不同光周期、限食和雌激素注射处理，利用 实时荧光定量 PCR 技术，对不同方式处理的黑线仓鼠不同组织中的相关繁殖基因的表达量 进行分析。首先，以黑线仓鼠下丘脑为材料，利用反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）技术， 克隆得到了 GPR147 的部分 cDNA 片段，长 355bp，属于编码区序列。对不同季节黑线仓 鼠下丘脑和卵巢、睾丸中的 GPR147 相对定量结果显示 GPR147 在下丘脑、睾丸中的表达 模式均是非繁殖期表达量显著高于繁殖期（P0.05），与黑线仓鼠的繁殖规律相一致，表 明在黑线仓鼠的非繁殖季节，RFRP-3 通过 GPR147 对黑线仓鼠的繁殖发挥抑制作用。其次，通过不同的光周期（16L:8D，12L:12D，8L:16D）处理黑线仓鼠，利用实时荧 光定量 PCR 技术，检测 RFRP-3/GPR147 等基因在雌、雄黑线仓鼠不同组织中的相对表达 量。长光照周期处理的黑线仓鼠，雌、雄下丘脑中 RFRP-3 的表达量显著高于（P0.05） 短光照周期处理黑线仓鼠的表达。下丘脑中 GnRH 的表达量随着光照时间的增加，表达量 显著增高，并且长光照周期下的表达量显著高于（P0.05）短光照周期。下丘脑中雌激素 受体（ER）的表达量短光照＞长光照＞中光照周期，并且短光照周期下的表达量显著高于（P＜0.05）长光照。下丘脑中 GPR147 的表达量短光照周期下显著高于（P＜0.05）长光 照，与 RFRP-3 的表达呈现出相反的表达模式。实验结果分析 RFRP-3 在长光照周期下表达上调，可能与黑线仓鼠机体中长光照下褪黑激素的分泌有关。 第三，本研究对实验对象的体重变化进行监测，并对限食组与对照组雄性黑线仓鼠下丘脑与性腺中，RFRP-3/GPR147 和 GnRH 的表达量进行了差异显著性检验，结果表明限食I组的体重显下降（P＜0.05），RFRP-3/GPR147 和 GnRH 在限食组的表达量显著高于对照组（P0.05）；并且限食组的体重显著低于对照组（P＜0.05）。结果表明 RFRP-3/GPR147系统可能参与了能量平衡对黑线仓鼠繁殖活动的调控。 最后，本研究对雌性黑线仓鼠注射外源雌激素，用实时荧光定量 PCR 技术，检测RFRP-3/GPR147、ER 和 GnRH 的表达量。处理组与对照组相比，下丘脑中 RFRP-3 的表达量显著升高（P＜0.05），提示雌激素能够上调 RFRP-3 的表达来增加它对繁殖活动的负反 馈作用。下丘脑中 ER 的表达量也显著上升，表明体内雌激素水平升高，导致雌激素受体 的表达水平显著升高（P＜0.05），雌激素通过其受体作用于 RFRP-3 神经元，RFRP-3 表 达水平升高，进而 GnRH 的表达受到抑制，HPG 的兴奋性被抑制，并且雌激素对 ER 的作 用存在剂量依赖性。卵巢中高浓度的外源雌激素注射使 RFRP-3/GPR147 的表达显著升高， ER 的量也显著的升高。下丘脑中 GnRH 的表达量在低浓度下显著升高（P＜0.05），在高 浓度雌激素注射下表达量降低，但是卵巢中 GnRH 变化不显著。结果表明，在不同雌激素 浓度的条件下，雌激素对不同部位，RFRP-3/GPR147 或者 Kiss-1/GPR54 系统的不同反馈 作用有关。低浓度水平下，可能雌激素通过另外的调控通路，引起 GnRH 表达水平的升高， 随着浓度的升高，抑制作用逐渐增强。关键词：黑线仓鼠，RFRP-3/GP