鳗鱼中磺胺类药物残留的charm ⅱ放射免疫法检测.docVIP

鳗鱼中磺胺类药物残留的Charm Ⅱ放射免疫法检测 福建水产,2006年8月第3期 JOURNALOFFUJIANFISHERIES NO.3 Aug.25.2006 鳗鱼中磺胺类药物残留的CharmII放射免疫法检测 陈健,林杰,黄晓蓉,郑晶,汤敏英,陈彬 (福建出入境检验检疫局,福建福州350001) 摘要:本文探讨应用CharmⅡ放射免疫分析方法检测鳗鱼中磺胺类药物残留.确定鳗鱼检测的制样和 控制点设定的方法,评价了免疫反应体系的灵敏度和特异性,验证了磺胺类最大残留限量50pc/ks的检测 稳定性,90分钟可出检测结果. 关键词:磺胺类;鳗鱼;CharmII放射免疫分析方法 磺胺类药物(Sulfonamides,SAs)是指具有 对氨基苯磺酰胺结构的一类药物的总称,其通过 干扰细菌的酶系统对氨基苯甲酸的利用而发挥抑 菌作用,后者是微生物生长必需物质叶酸的组成 部分.自2O世纪3O年代研究证明了SAs抑菌的 基本结构后,相继合成了各种SAs,由于其抗菌 谱广,价格低廉,目前仍是兽医Il缶床和畜牧养殖 业中最常用的药物添加剂之一,但也带来了食品 安全和环境污染等系列问题. 研究表明与其它常用抗生素相比,SAs可能 更易诱导菌株应选择压力而产生耐药性.此外, SAs药物还会导致过敏反应,尿和造血功能紊乱 等副作用.如磺胺二甲基嘧啶等可能诱发啮齿类 动物如鼠的甲状腺增生,对其激素样效应和潜在 致癌性质正在进一步研究中.由于SAs在体内作 用和代谢的时间较长,通过任何途径摄人的磺胺 都有可能在人体中蓄积,蓄积浓度超过一定值时 将对人体机能造成损害.因此,联合国食品法典 委员会(CAC)和许多国家规定,食品和饲料 中SAs总量以及磺胺二甲基嘧啶等单个SAs的量 均不得超过0.1mg/kg.而且伴随兽药残留毒理 学的发展和风险分析手段的进步,各国对SAs在 动物源性食品中的残留限量做出了越来越严格的 规定,如日本对食用动物肌肉中磺胺二甲基嘧啶 的最大残留限量规定为方法检测低限,即 0.01mg/kg. 关于SAs残留的检测从早期的分光光度法, 荧光法,薄层色谱法到近些年的液相色谱法,气 相色谱一质谱法,液相色谱一质谱法,毛细管电 泳法和超临界流体色谱法,几乎所有的分析理论 和技术在SAs残留分析中都得到了研究和应用, 其中采用最多的筛选方法是反相高效液相色谱法 (HPLC),后来发展的酶联免疫吸附测试方法 (ELISA)作为筛选方法也得到了广泛的应用. 但是这些检测方法都存在处理方法繁琐,操作时 间长及只能检测单个磺胺类药物的问题.基于细 菌受体分析的CharmII放射免疫法的样品前处理 提取方法简便,具有灵敏度高,特异性强的特点, 并且可以检测磺胺类残留总量,已经为欧盟国家 和美国FDA认可并且应用于初筛分析,目前国内 尚未见有关鳗鱼的检测报道.本研究建立了鳗鱼 中磺胺类残留ChannⅡ放射免疫检测方法. 1材料和方法 1.1设备和材料 Charm6600/7600分析仪:美国Charm公司 生产;IEC离心;均质器;涡旋混合器;恒温孵 育器(65±1℃;80±2~C);闪烁液加液器; 50mL离心管;硼硅玻璃试管及试管塞;pH试 条;药片压杆. 1.2样品和试剂 1.2.1检测基质鳗鱼 1.2.2检测试剂磺胺类CharmII检测试剂盒; 闪烁液(Optifluor);阴性对照液;多抗标准品. 以上试剂均由美国Charm公司提供. 第3期陈健等:鳗鱼中磺胺类药物残留的CharmH放射免疫法检测9 1.2.3磺胺类药物标准品磺胺甲基嘧啶 ($M1),磺胺二甲基嘧啶(SM2),磺胺间甲氧嘧 啶(SMM),磺胺间二甲氧嘧啶(SDM),磺胺喹嗯 啉(SQX),磺胺甲噻二唑(STZ),磺胺吡啶 (SPD),磺胺异嘌唑(SIZ),磺胺甲基异嗯唑 (SMZ),磺胺嘧啶(SD),磺胺噻唑(sT),磺胺甲 氧哒嗪(SMP),磺胺氯哒嗪(SCP). 以上标准品由Sigma公司提供. 1.2.4恩诺沙星,新霉素,庆大霉素,链霉素, 螺旋霉素,林可霉素,四环霉素,氯霉素,红霉 素,青霉素G标准品. 以上标准品由Sigma公司提供. 1.3方法 1.3.1测试原理 测定的基础是竞争性受体免疫反应.用 [H]标记的磺胺二甲嘧啶(示踪剂)与样品中 磺胺类药物的竞争结合试剂(微生物细胞上的 特异性受体)上的磺胺结合位点,当样品中残 留磺胺类药物时,残留物与受体上的结合位点结 合,从而阻止了[H]标记的磺胺类药物与结 合剂位点的结合.样品中的磺胺类药物含量越高 竞争的结合位点越多,[H]标记磺胺二甲嘧啶 的则越少,用Charm11分析仪测定样品中的 [H]含量的cpm(每分钟脉冲数)值,cpm值 越低则样品中的磺胺类药物残留量越高. 1.3.2提取步骤 (1)取50