samp8小鼠增龄性氧化应激与炎症相关 蛋白表达及ss31肽的干预作用-aging oxidative stress, inflammation-related protein expression and ss31 peptide intervention in sam p8 mice.docxVIP

目录中文摘要1英文摘要5英文缩写9研究论文SAMP8小鼠增龄性氧化应激与炎症相关蛋白表达及SS31肽的干预作用前言10材料与方法12结果23附图25附表30讨论32结论35参考文献36综述NF-κB可作为治疗阿尔茨海默病关键靶点的研究现状41致谢55个人简历56SAMP8小鼠增龄性氧化应激与炎症相关蛋白表达及SS31肽的干预作用摘要目的：阿尔茨海默病（Alzheimerdisease，AD）是最常见的、与年龄相关的中枢神经系统退行性疾病。其临床特征主要表现为认知功能逐渐减退，日常生活能力不断下降，并伴有行为障碍和神经精神症状等；病理学特征主要表现为脑组织神经元数量减少，细胞外β-淀粉样蛋白（β-Amyloidpeptide，Aβ）沉积、颗粒空泡样变性及神经原纤维缠结（NFTs）等。65岁以上人群AD发病率高达7%～10%，给社会和家庭带来了沉重负担。因此，探讨AD的发病机制并寻求有效的治疗药物是当今医学界研究的热点。已有证据表明，该病的发病机制可能与老化、Aβ沉积、慢性神经炎症反应及氧化应激有关。Aβ蛋白是老年斑（senileplaques，SP）的主要成分，是AD病理和导致神经退行性病变主要的致病分子。核转录因子NF-κB（nuclearfactorkappaB）可参与调控炎症反应和免疫反应中各种细胞因子和趋化因子的表达，引起炎性细胞的激活及炎性因子的释放，进而调节细胞分裂和凋亡反应。核转录因子NF-E2相关因子（nuclearfactorerythroid2-relatedfactor2，Nrf2）是参与细胞氧化反应的关键因子，通过激活Nrf2/ARE通路，调节一系列抗氧化反应蛋白和Ⅱ相解毒酶的表达，发挥其抗氧化作用。快速老化SAMP8（senescenceacceleratedmouseprone8,SAMP8）小鼠模型具有与AD相关的典型的行为学改变和病理学特征，被认为是研究AD病情发展过程中神经退行性改变及可能治疗策略的理想动物模型。正常老化SAMR1（senescence-acceleratedmouse-resistant1,SAMR1）小鼠作为其正常对照模型。新型线粒体靶向抗氧化剂SS31肽（H-D-Arg-Dmt-Lys-Phe-NH2），易通过血脑屏障到达线粒体内膜，具有清除氧自由基（reactiveoxygenspecies，ROS）、抗炎性反应、保护线粒体和神经元突触结构的功能，但SS31的分子机制及将其应用于AD模型SAMP8小鼠的干预作用尚不十分明确。本实验旨在探讨4、8、12月龄SAMP8小鼠随年龄增长出现的Aβ蛋白水平、NF-κB及Nrf2信号通路变化；8月龄SAMP8小鼠经SS31肽干预8周后Aβ蛋白、NF-κB及Nrf2通路的表达变化情况，进一步探讨SS31的干预作用，为AD的发病机制及治疗方法提供新的思路。方法：以25~32g雄性SAMP8及SAMR1小鼠为研究对象，小鼠均购自天津中医药大学，清洁级动物，于河北省人民医院临床研究中心饲养，以标准鼠粮及饮用水喂养至合适月龄。实验1：18只SAMP8小鼠随机分为三组（n=6），分别喂养至4月龄（4Mgroup）、8月龄（8Mgroup）和12月龄（12Mgroup）。实验2：8月龄SAMR1溶媒盐水注射组（SAMR1vehiclegroup，n=6），作为正常对照组；8月龄SAMP8小鼠12只随机分为2组：溶媒盐水注射组（SAMP8vehiclegroup，n=6），作为快速老化对照组；SS31处理组（SS31group，n=6），注射前应先将SS31溶于生理盐水中，浓度为1nM（该剂量已被证实为有效且无毒副作用）。以上三组均以5mg/kg/day的剂量连续腹腔注射8周。取各组小鼠海马组织，采用westernblot蛋白分析法测定Aβ42、NF-κBp65、HO-1的总蛋白表达量及Nrf2在胞核（nuclearNrf2，N-Nrf2）、胞浆（cytoplasmNrf2，C-Nrf2）中的蛋白表达量；采用RT-qPCR技术测定NF-κB、Nrf2、HO-1的mRNA表达量。结果：1快速老化过程中，SAMP8小鼠海马组织Aβ42蛋白水平、NF-κB及Nrf2/ARE信号通路活性随月龄增长呈现增高趋势1.1Aβ42的蛋白水平随月龄增长表达增强Aβ42的蛋白水平在4M，8M，12M呈逐渐增高趋势，其中12M较4M增高明显（P0.05），表明神经毒性物质Aβ42在海马组织随月龄增长其蛋白表达逐渐增强（Fig.2B）。1.2NF-κBp65在快速老化过程中，其通路活性随月龄增长逐渐增强NF-κBp65基因表达和蛋白水平在4M，8M，12M呈逐渐增高趋势，其中12M较4M明显增高（P0.05），表明NF-κB信号通路逐渐激活，炎症反应随月龄增长逐渐加重（Fi