苏教版教学教案考点4：制备和应用酶的固定化技术.docVIP

选修一：考点4：制备和应用酶的固定化技术 【学习目标】 1．说出固定化酶概念和方法(A) 2．制备固定化酵母细胞(B) 【知识梳理】 （一）课题背景 酶：优点：催化效率高，低耗能、低污染，大规模地应用于食品、化工等各个领域。 实际问题：对环境条件敏感，易失活；溶液中的酶很难回收，不能再次利用，提高了生产成本；反应后的酶会混合在产物中，如不除去，会影响产品质量。 设想：能否有一种方法使酶发挥它的优点，而没有这些缺点？ 固定化酶：优点 ：容易与水溶性反应物和生成物分离，可被反复使用 实际问题：一种酶只能催化一种化学反应，而在生产实践中，很多产物的形成 都是通过一系列的酶促反应才能得到的 设想：细胞中有多种酶，能否用固定化酶类似的技术来处理细胞？ 固定化细胞：优点：成本低，操作更容易 （二）、固定化酶的应用实例 高果糖浆是指果糖含量为42%的糖浆 能将葡萄糖转化为果糖的酶是葡萄糖异构酶。使用固定化酶技术，将这种酶固定在一种颗粒状的载体上，再将这些酶颗粒装到一个反应柱内，柱子底端装上分布着许多小孔的筛板。酶颗粒无法通过筛板的小孔，而反应溶液却可以自由出入。生产过程中，将葡萄糖溶液从反应柱的上端注入，使葡萄糖溶液流过反应柱，与 接触，转化成果糖，从反应柱的下端流出。反应柱能连续使用半年，大大降低了生产成本，提高了果糖的产量和质量。 （三）、固定化细胞技术 固定化酶和固定化细胞是利用物理 或 化学 方法将酶或细胞固定在一定空间内的技术，包括 包埋法 、化学结合法和物理吸附法。一般来说，酶更适合采用化学结合法 和物理吸附法固定，而细胞多采用包埋法固定化。这是因为细胞个大，而酶分子很小；个大的难以被化学结合或吸附，而个小的酶容易从包埋料中漏出。 包埋法固定化细胞即将微生物细胞均匀 包埋在不溶于水的多孔性载体中。常用的载体有明胶 、琼脂糖 、海藻酸钠 、醋酸纤维素和聚丙烯酰胺等。 〖思考1〗对固定酶的作用影响较小的固定方法是什么？ 吸附法 〖思考2〗将谷氨酸棒状杆菌生产谷氨酸的发酵过程变为连续的酶反应，应当固定（细胞）；若将蛋白质变成氨基酸，应当固定（酶）。 （四）、实验操作 (1)制备固定化酵母细胞 制备固定化酵母细胞需要的材料是干酵母 、CaCl2 和海藻酸钠溶液 1.酵母菌的活化 活化就是处于休眠 状态的微生物重新恢复正常的生活状态。 2.配制物质的量尝试为0.05mol/L的Cacl2溶液 3.配制海藻酸钠溶液 加热溶化海藻酸钠时要注意：微火加热并不断搅拌，防止海藻酸钠焦糊 4.海藻酸钠溶液与酵母菌细胞混合 5.固定化酵母细胞 以恒定的速度缓慢地将注射器中的溶液滴加到配制好的CaCl2 溶液中，并浸泡30分钟 (2)用固定化酵母细胞发酵 1.将固定好的酵母细胞用 无菌水 冲洗2-3次。 2.发酵时的温度就为25℃ ，时间24h 。 〖思考4〗加热溶化海藻酸钠时微火加热并不断搅拌的目的是什么？ 防止海藻酸钠焦糊 〖思考5〗为什么要海藻酸钠溶液冷却后才能加入酵母细胞？ 防止高温杀死酵母细胞 〖思考6〗发酵过程中锥形瓶为什么要密封？ 酵母菌的酒精发酵需要缺氧条件 〖思考7〗锥形瓶中的气泡和酒精是怎样形成的？酵母菌进行无氧呼吸产生的 〖思考8〗在利用固定化酶或固定化细胞进行生产的过程中，需要无菌操作码？ 需要 （五）、结果分析与评价 1.观察凝胶珠的颜色和形状 如果制作的凝胶珠颜色过浅、呈白色，说明海藻酸钠的浓度偏低，固定的酵母细胞数目较少；如果形成的凝胶珠不是圆形或椭圆形，则说明海藻酸钠的浓度偏高，制作失败，需要再作尝试。 2.观察发酵的葡萄糖溶液 利用固定的酵母细胞发酵产生酒精，可以看到产生了很多 气泡 ，同时会闻到 酒香 。 反馈练习 一、选择题 1、酶的固定化常用的方式不包括 （ ） A．吸附 B．包埋 C．连接 D．将酶加工成固体 2．海藻酸钠在水中溶解的速度较慢，需要通过加热促进其溶解，采用的最好的加热方法是（ ） A．快速加热 B．持续高温加热 C．小火间断加热 D．灼烧加热 3．高果糖浆生产需要的酶是（ ） A．葡萄糖异构酶 B．蔗糖酶 C．麦芽糖酶 D．果糖酶 4．研究认为，用固定化酶技术处理污染物是很有前途的，如将大