血小板对ra滑膜炎症和增生的影响及蛭元方干预分析-effect of platelet on ra synovitis and hyperplasia and intervention analysis of zhiyuan prescription.docxVIP

摘要目的：本研究通过观察血小板对类风湿关节炎（RA）大鼠滑膜炎症和增生的影响，来探讨 蛭元方对活化血小板加剧 RA 大鼠滑膜炎症和增生的作用并研究其可能作用机制，为本 方临床应用提供实验依据。方法：1、将常规培养的大鼠 RSC364 细胞随机分为正常组（N）和 RA 模型组（RA ，0.5、1、2、5 μg/L TNF-α）。先以激光共聚焦显微镜观测常规培养的 RSC364 细胞，并于 400 倍镜下拍照；再运用酶联免疫吸附试验（ELISA）法和噻唑蓝（MTT）法分别检测各实 验组 RSC364 细胞培养上清中白介素-6（IL-6）、白介素-8（IL-8）的生成量及其增殖情 况。2、采用密度梯度离心的方法制备血小板，并以 5μg 牛 II 型胶原蛋白分别诱导其活 化 1h、5h 和 10h，运用 ELISA 法检测各实验组血小板上清中 sP-选择素的表达情况；将 常规培养的大鼠 RSC364 细胞随机分为：正常组（N）、RA 模型组（RA）、非血小板活 化组（NP）、活化血小板干预组（AP），参照分组情况，依次加入不同浓度 TNF-α、未 活化血小板及活化血小板，运用 ELISA 法和 MTT 法分别检测各组 RSC364 细胞上清中 IL-6 及 IL-8 的生成量及其增殖情况。3、将常规培养的大鼠 RSC364 细胞随机分为正常组（N）、RA 模型组（RA）、活化 血小板干预组（AP）、蛭元方干预组（ZG），参照分组情况，依次加入不同浓度 TNF-α、 活化血小板、10% 蛭元方含药血清，运用 ELISA 法分别检测 RSC364 细胞上清中 IL-6、 IL-8 的生成量及血小板上清中 sP-选择素的表达情况，采用 MTT 法观察 RSC364 细胞 的增殖情况。结果：1、细胞形态学观察：常规培养的大鼠 RSC364 细胞呈长梭形，胞浆丰富，细胞外 端有伪足伸出，排列较为不规则，符合成纤维细胞的形态学特点；在 0.5、1、2 μg/L TNF-α 存在下，RA 模型组 RSC364 细胞上清中 IL-6 和 IL-8 的生成量均明显增加，并呈现剂量 依赖性，与同一浓度的正常对照组相比，均具有显著性差异（P 0.05）；在 5μg/L TNF-αI存在下，RSC364 细胞增殖率是 10.93%，明显高于正常对照组，差异具有统计学意义（P0.05）。2、牛 II 型胶原蛋白活化血小板 5h 时，血小板上清中 sP-选择素含量为 142.30 pg/mL， 与 1h 和 10h 相比，5h 时血小板 s 上清中 P-选择素的含量最高，差异显著（P 0.05）； 与 RA 模型组相比，活化血小板干预组 RSC364 细胞生成 IL-6 和 IL-8 的量均明显增加（P 0.05 和 P 0.01），滑膜细胞增殖率为 25.51%，亦明显升高（P 0.05）。3、与血小板干预组相比，蛭元方干预组 RSC364 细胞的 IL-6 和 IL-8 生成量均显著 降低（P 0.05 和 P 0.01），其增殖率为 11.90%，亦有明显下降（P 0.05），血小板 sP- 选择素的表达量为 42.80pg/mL，也显著降低（P 0.05）。结论：1、采用肿瘤坏死因子-α（TNF-α）干预 RSC364 细胞的方法，可实现体外建立 RA大鼠细胞模型。2、活化血小板能加剧 RA 大鼠滑膜细胞的炎症和增生反应。3、蛭元方能有效缓解血小板对 RA 大鼠滑膜炎症及增生的促进作用，其机制可能 与抑制 P-选择素的表达有关。关键词类风湿关节炎（RA）血小板 蛭元方 白细胞介素-6 白细胞介素-8P-选择素IIAbstractObjective：To study the effect of platelet in inflammation and proliferation of Rheumatoid arthritis (RA) rats’s synovial cells,and Zhiyuanfang inhibiting activated platelet in amplifying inflammation and proliferation of synovial cells in the RA rats,and the possible mechanism.This would provide experimental basis for clinical applications.Method：Normal cultured RSC364 cells were divided into normal control group(N) and RA model group (RA, 0.5,1,2,5 μg/L TNF-α).We us