血小板糖萼蛋白elisa方法建立与血小板活化因子对脑梗死患者筛选诊断意义-establishment of platelet glycocalyx protein elisa and significance of platelet activating factor in screening and diagnosing cerebral infarction patients.docxVIP

血小板糖鄂蛋白的 ELISA 方法的建立与血小板活化因子对脑梗死患者筛选诊断的意义 中文摘要背景1. 酶联免疫吸附测定法(ELISA 方法)是采用抗原与抗体的特异反应将待测物与 酶连接，然后通过酶与底物产生颜色反应，用于定量测定。操作步骤如下：（1）将特 异性抗体与固相载体连接，形成固相抗体。（2）加受检标本：使之与固相抗体接触反 应一段时间，让标本中的抗原与固相载体上的抗体结合，形成固相抗原复合物。（3） 加酶标抗体：使固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。（4）加底物：夹心式复合 物中的酶催化底物成为有色产物。根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量。该 法具有特异性强，且操作简便，灵敏度和重复性较好等优点。2. 脑血栓是缺血性脑血管病中最常见的一种.它是由于供应脑部的动脉内有血栓 形成 ,造成动脉管腔狭窄或完全闭塞 ,使其供血区局部脑组织缺血、缺氧、坏死而引 起的神经功能障碍。俗称中风，脑血栓形成原因是脑血管内的动脉粥样硬化斑块使得 血管狭窄 ,表面粗糙不平 ,而后斑块破裂出血 ，激活体内的血液凝固系统形成血栓， 血液凝固过程血小板释放多种因子。急性脑血栓形成的发病涉及三个因素：血管壁结 构完整性破坏，止血、凝血、纤溶系统的失平衡和血流状态的改变，三种因素相互作 用，共同构成血栓形成的基本条件。近些年来，通过对脑血栓形成发病机制的深入研 究，发现很多分子标志物在血栓形成过程中发挥着的重要作用，且也能够反映上述三 种因素在血栓形血栓前状态．并对血栓形成后不同阶段的干预提供依据。目的1.建立血小板糖鄂蛋白 ELISA 方法，并且用于临床检测。2. SGC，P 选择素，GP1bɑ对脑梗死患者筛选和诊断的意义。中文摘要血小板糖鄂蛋白的 ELISA 方法的建立与血小板活化因子对脑梗死患者筛选诊断的意义方法1．选用 2 株互不干扰的单克隆抗体，建立双抗夹心，及选用抗体 AN51 做包被 抗体，选 SZ-2 做标记抗体 ，用 biotin 标记 SZ-2。AN51 包被在 96 板孔上，再加入 脑梗死患者样本（含 GC）与固相载体反应，然后再加入另一种 biotin 标记的抗体 SZ-2， 最后再与底物氧化还原反应而成颜色，测其 35 例脑梗死患者 OD 值。2.用 SZ-2 抗体抗 GP1bɑ再用流式检测 35 个脑血栓患者的 GP1bɑ表达和用 SZ-51抗体抗 P 选择素再用流式检测 25 个脑梗塞患者 P 选择素的表达。结果1. SGcELISA 测量范围 0.15－5.25 ug／ml,灵敏度：50 ug／l，精密度：批内低、 中、高值变异系数分别为 8.25％、7.35％和 3.99％(n=6)，批间分别为 9．55％、8.82％和 5.48％(n=6)；准确度：平均回收率为 101.88%。35 例脑梗死血清中的 SGC 浓度： 健康对照组 SGC 浓度为 2.04±0.46 明显低于脑梗死患者的 SGC 浓度为;3.4±0.34ug／ ml。两组间比较差异具有显著性( P 0. 05)。2. 脑 血 栓 组 血 小 板 CD62P(12.6±1.9% ） 阳 性 百 分 率 显 著 高 于 对 照 组 (6.46±1.50%），脑血栓血小板 GP1bɑ(13.8±2.7) %阳性百分率显著低于对照组（24.31±6.5%）。 两组间比较差异具有显著性( P 0. 05)。结论：1. 建立血小板糖鄂蛋白 ELISA 方法2. SGC，P 选择素，GP1bɑ对脑梗死患者筛选和诊断的意义。 关键词ELISA 方法，脑梗死，血小板活化因子作者：何娟 指导教师：方琪 教授Establish of SGC ELISA method and Platelet factor for screening and diagnosis of patients of cerebral infarctionAbstractBackground：An enzyme linked immunosorbent assay (ELISA method) is used with an antibody specific for the antigen analyte and the enzyme reaction is connected, and produces a color reaction by the enzyme with a substrate for the quantitative determination. Steps are as follows: (1) the specific antibody and solid-phase carrier connected to form a solid phase ant