液态奶中阪崎肠杆菌污染状况的分析-analysis of enterobacter sakazakii contamination in liquid milk.docxVIP

1 引言 1.1立题背景及意义食品安全是一个重大的世界性公共卫生问题。2000年，世界卫生大会通过了《食 品安全决议》，制定了全球食品安全战略，将食品安全列为公共卫生的优先领域。 全 球各地连续发生一系列的食源性疾病爆发事件：英国的疯牛病；日本的出血性大肠杆 菌O157：H7和雪印牛奶的葡萄球菌肠毒素中毒事件；法国的李斯特氏菌中毒；我国 2008年的三氯腈胺事件。全球范围内的禽流感等引起全世界范围的震惊[1]，食源性疾 病也已成为中国的头号食品安全问题。1961年，英国两位科学家首次报道2例由该菌引起的脑膜炎病例，1979年Monore 和Tift[2]首次报道了阪崎肠杆菌感染但无脑膜炎症状的新生儿菌血症，以后在世界范 围内由该菌引起新生儿脑膜炎，菌血症和坏死性小肠结肠炎的病例相继被报道。美国 2002 年的监测表明，1 岁以下婴儿阪崎肠杆菌的感染率为 1/10 万，而出生体重偏 低的新生儿感染率是 8.7/10 万，感染死亡率高达 20% 至 50% 以上[3]。尽管阪崎肠 杆菌可以从多种食品中检出，但在新生儿感染该菌事件的调查中可以发现婴儿配方奶 粉是主要的感染渠道。婴儿配方奶粉中阪崎肠杆菌的污染问题引起了FAO/WHO及各 国的高度重视。据报道即使低浓度的污染也可在奶粉的冲调、放置过程中大量繁殖而成为感染的 危险因素。以下三种主要途径可以导致婴儿配方奶粉中阪崎肠杆菌的污染：①通过生 产婴儿配方奶粉的原料；②在巴氏杀菌后，由配方奶粉污染或其它添加剂干粉带入；③婴儿食用前被污染。据FAO/WHO（联合国粮农组织/世界卫生组织）专家组的报告， 目前缺乏发展中国家婴儿配方奶粉的污染资料，缺乏因食用已污染的婴儿配方奶粉导 致的疾病状况资料，但不能排除发展中国家没有阪崎肠杆菌感染的事件[4]。当前国外使用的阪崎肠杆菌检测方法仍是常规培养法，由于其检测周期长（5～ 7d）、程序复杂、所需试剂繁多等缺点已远远不能满足现代检测要求。FAO/WHO在2004 年[5]召开了两次国际相关会议，倡导采用国际通用的分子生物学方法来检测阪崎肠杆 菌，以弥补传统方法的局限性。我国是一个食品生产和消费大国，随着市场经济的快 速发展和生活水平的提高，特别是加入WTO后，消费者对食品安全更加关注，食品 安全与食品贸易的关系更为密切，提高我国食品安全水平的要求越来越迫切。为确保 食品安全与食品贸易，需要大力加强食品检验的力度，迫切需要建立阪崎肠杆菌污染 状况进行研究从而获得宝贵数据，指导阪崎肠杆菌的检验方法。1.2阪崎肠杆菌简介1.2.1 阪崎肠杆菌生物学性状阪崎肠杆菌（Enterobacter sakazakii）作为肠杆菌科的一种一直被称为“黄色阴沟肠杆菌”（Enterobacter cloacae），直到1980年才以日本细菌学家Riichi Sakazakii的名字 命名，即“阪崎肠杆菌”，以表彰他在肠道细菌学研究方面的突出贡献[6]。不像其它肠 杆菌，阪崎肠杆菌D-山梨糖醇发酵阴性，产胞外DNA酶，在TSA、BHI琼脂和血平板 上培养48~72h后长出黄色菌落，在25℃培养比在36℃培养黄色色素产生更显著，而且 株与株之间黄色色素产生水平也存在差异。阪崎肠杆菌α-葡萄糖苷酶活性均为阳性， 其它肠杆菌均为阴性，而且只有阪崎肠杆菌缺少内酰胺酶[6，7] 。阪崎肠杆菌的生化特性见表1[8]表 1阪崎肠杆菌生理生化特性Table 1 Characteristic of Enterobacter sakazakii性状结果性状结果性状结果革兰氏染色-氧化酶-吲哚-甲基红-V-P+柠檬酸盐+硫化氢-脲酶水解-苯丙氨酸脱氢酸-赖氨酸脱羧酸-精氨酸双水解酶+鸟酸氨脱羧酶+运动性+明胶液化+KCN 生长+丙二酸利用+葡萄糖产酸+葡萄糖产气+D-阿东醇产酸-D-阿拉伯糖产酸+纤维二糖产酸+卫矛醇产酸-甘油产酸+间-肌醇产酸-乳糖产酸+麦芽糖产酸+D-甘露醇产酸+D-甘露糖产酸+蜜二糖产酸+α-甲基-D-葡萄糖苷产酸+1.2.2 阪崎肠杆菌毒力、耐热性和传播途径到目前，还未知阪崎肠杆菌的致病机理或蛋白毒力因子[9]，体外试验用中国仓鼠 卵巢（CHO）滤液、Vero、Y-1细胞作为细菌培养物，结果显示细胞裂解且Vero、Y-1 细胞更易受阪崎肠杆菌侵害。分别给小鼠静脉注射和口服发现每鼠静脉注射达到 108cfu可致死，口服两株菌可致死（一株来自临床，另一株由食品分离出来）。Pagotto 于 2003 年进行动物试验证实所有低于 107cfu 剂量都会有剂量反应线性关系 [10] 。 FAO/WHO对阪崎肠杆菌危险评估分析中指出一株菌就能引发感染[5]。来自荷兰的成 人感染报道低于104cfu剂量就可能存在线性关系。Nazarwec-White[11]和Farber