液相微萃取在中药黄酮类成分分析分析及其与蛋白结合参数测定中的应用-application of liquid phase microextraction in analysis of flavonoids in traditional chinese medicine and determination of its binding parameters with protein.docxVIP

第一部分液相微萃取在黄酮类化合物分析中的比较及其应用包含三部分内容：Ⅰ 基于漂浮有机液滴凝固液相微萃取的黄酮类化合物分配系数研究及其含量测定 Ⅱ 两相和三相中空纤维液相微萃取在黄酮类化合物分析中的比较及其应用Ⅲ 漂浮有机液滴凝固液相微萃取和中空纤维液相微萃取在黄酮类化合物分析中的比较Ⅰ基于漂浮有机液滴凝固液相微萃取的黄酮类化合物 分配系数研究及其含量测定摘要目的 建立一种快速的样品前处理技术—漂浮有机液滴凝固液相微萃取（SFODLPME）与HPLC 结合测定中药样品中 8 种黄酮类低丰度成分二氢杨梅素、杨梅素、漆黄素、槲皮素、 柚皮素、山柰素、异鼠李素和白杨素的含量。揭示了黄酮类化合物富集倍数与浓度及与供 相体积之间的关系，定义并阐述了 EF1μg/mL 及其物理意义，计算了漂浮有机液滴凝固相体 积及黄酮类化合物的表观分配系数。方法 对漂浮有机液滴凝固液相微萃取的各参数进行优化，优化后的液相微萃取条件：在 5.00 mL 供相溶液中，加入 40μL 正十二醇萃取有机溶剂，在 600r/min 搅拌速度下，室温微 萃取 40min。萃取完毕后，静置分层并将萃取玻璃管立即放入-20℃的冰箱中冷冻，6min 后正十二醇凝固，取出正十二醇固相于平底小烧杯中，待融化后用电吹风吹干正十二醇， 冷却后用 50μL 甲醇溶解，20μL 该溶液进行 HPLC 分析。色谱条件：采用 Eclipse XDB-C18 柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)，流动相为甲醇：乙腈：0.3%磷酸溶液梯度洗脱，流速为 1 mL/min 和 0.8 mL/min 梯度洗脱，柱温 35℃，在波长 300 nm 处，测定中药中 8 种黄酮类有效成分 的含量。结果 漂浮有机液滴凝固液相微萃取-HPLC 测定二氢杨梅素、杨梅素、漆黄素、槲皮素、 柚皮素、山柰素、 异鼠李素和白 杨素的 线性范围为 0.01~10.00μg/mL ；检出限为 1.0~0.01ng/mL；日内精密度 RSD6.0%,日间精密度 RSD7.0%；中药老鹳草、银杏、槐米 和侧柏中分析物的回收率在 96.0% ~104.2%。当加入萃取溶剂体积为 40μL 时，形成的漂 浮有机液滴凝固相体积为（52±14）μL；8 种黄酮类成分的表观分配系数在 44.8~243.9 之 间。结论 该方法操作简单，富集倍数高，对常规前处理方法难以分析的低丰度微量、痕量 黄酮类成分的分析具有重要的意义。关键词 漂浮有机液滴凝固液相微萃取；表观分配系数；富集倍数；黄酮类化合物；ⅠBased on solidification of floating organic drop liquid-phase microextraction for determination of partition coefficient and contents offlavonoids compoundsAbstractObjective: To establish a rapid sample pretreatment technology-solidification of floating organic drop liquid-phase microextraction （SFODLPME）combined with HPLC determination of eightkinds of low-abundance flavonoids ingredients dihydromyricetin, myricetin, fisetin, quercetin, naringenin, kaempferide, isorhamnetin and chrysin from traditional Chinese medicines(TCMs). In this method, the relations between the enrichment factor and concentration of flavonoids compounds were revealed, EF1μg/mL was defined and expounded; solidification phase volume of floating organic drop and apparent partition coefficient of flavonoids compounds were calculated by the relations between the enrichment factor and the donor phase volume of flavonoids compounds.Method: The main par