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第五章 中药指纹图谱Fingerprints of Chinese Materia Medica 同一个成药，疗效一致吗？ 中药材不同品种、产地、加工： 不同厂家： 不同工艺： 不同辅料： 含量一致，疗效一致？ 不同厂家银杏提取物的色谱指纹图谱 有效成分含量悬殊的人参Great disparity among individual Ginseng roots Angelicae Formosanae Radix (白芷) A: Typical sample of ‘Bai Zhi’ B: Sulfur fumed sample of ‘Bai zhi’ (current popular practice) The sulfur-fumigated sample showed the major coumarin contents have been destroyed seriously (lost 60% - 80%). 质量相差悬殊的‘连翘’药材Great disparity of ingredients in different ‘Lianqiao’ crude drugs 青翘→老翘→无籽老翘所含有效成分递减 2010版药典丹参提取物指纹图谱 中药指纹图谱的含义（掌握） 中药经适当处理后，采用一定的分析手段，得到的能够标示该中药特征的共有峰的图谱。 中药指纹图谱的特性（掌握） 稳定性（重现性） 指纹图谱研究的主要目的 对中药质量标准的补充和提高。 控制原料、中间体、成品的一致性，控制工艺，减少批间差异。 相同处方，不同工艺，疗效？ 指纹图谱中应包含的信息 对于中药材和中药饮片：种的共性，用药部位的共性，产地的个性，采收期、炮制方法的个性信息。 对于半成品和中药制剂：原药材（甚至辅料）的信息；工艺信息等。 药效信息：药效信息。 二、指纹图谱研究手段 色谱技术 光谱技术　UV　IR 波谱技术　MS NMR X-射线衍射法 分子生物学技术 TLC举例：区分不同品种 TLC举例：监控工艺 HPCE指纹图谱 红外光谱图 中国药典规定：小蓟在开花时采。 根据1384cm-1处吸收峰的有无，可以鉴别其采集时间是否正确。 三、指纹图谱构建程序 一、样品收集 最关键的步骤 真实性 代表性 10批以上 原药材 ：不同产地、不同采收季节等 二、供试品溶液制备 原则 1. 确保中药中的主要化学成分或有效成分在图谱中得以体现 2. 所含成分的理化性质和检测方法 二、供试品溶液制备 1.原药材、饮片供试品溶液的制备 尽可能与生产工艺的提取溶剂接近或一致 定量操作进行 二、供试品溶液制备 2. 半成品/中间体供试品溶液的制备 参考制剂和产品制备工艺 二、供试品溶液制备 2. 中药制剂供试品溶液的制备 直接使用、稀释或溶剂提取的方式 三、对照品（参照物）溶液制备 1. 参照物的选择 道地药材/饮片 半成品 制剂 主要活性成分或指标成分 内标物 2. 合适溶剂 四、指纹图谱实验研究 原则： 专属性、整体性、重现性 试验方法 试验条件 ? 液相色谱 ● 色谱柱：比较试验加以选择 流动相：至少用三种不同组成比较 适宜的柱温和检测波长 五、方法学验证 1. 稳定性试验 供试品溶液的稳定性 五、方法学验证 3. 重复性试验 实验方法的重复性 n=5 峰面积比值 RSD 不大于3％ 保留时间：平均相对保留时间±1min 注意事项 HPLC和GC指纹图谱：记录时间一般为1小时； TLC指纹图谱：须提供从原点至溶剂前沿的图谱； 光谱方法制定指纹图谱：必须按各种光谱的相应规定提供全谱。 对于化学成分类型复杂品种，必要时可建立多张指纹图谱。 四、指纹图谱分析步骤 标定共有指纹峰，确定参照峰 五、指纹图谱的评价 要求“准确的辨认”而不是“精密的测量”； 比较供试品与对照品的色谱指纹图谱要求“相似”而不是“相同”。 评价色谱比较的结果，是根据其模糊属性，着眼于宏观的规律性的特征分析，即着重辨认完整色谱的“图貌”，而不是求索细枝末节。 指纹图谱相似度评价 直观分析比较：看一看 量化数据比较：算一算（重叠率，相似率等） 计算机辅助相似度评价 重叠率和相似率计算 例：银杏提取物EGB761 EGB761中含总黄酮成分24%，萜类内酯6%，原花青素类7.0% ，羧酸类成分13.0%，儿茶素类2.0%，非黄酮类苷类20%，高分子化合物4.0%，无机物5.0%，水分溶剂3.0%，其他3.0%。 有害成分银杏酸类≤5ppm 银杏叶提取物指纹图