实验动物的抓取固定.doc

免疫学实验指导 西北民族大学 实验中心 2008年7月 目 录 实验室规则 第一章 实验动物的基本操作 实验一 实验动物的血型鉴定间接凝集反应 一间接血球凝集试验协同凝集试验凝集吸收病毒血凝血凝抑制试验免疫电泳补体的溶血试验 血清总补体溶血活性（CH50）测定补体依赖性细胞毒试验 补体结合反应单克隆抗体的制备第免疫细胞的分离白细胞的分离自然沉降法白细胞高分子量的聚合物沉降法白细胞PBMC 实验三 T、B淋巴细胞及T细胞亚群的分离纯化 一、AET-E花环T淋巴细胞）PBMC中单核和巨噬细胞的分离 一、粘附贴壁法人外周血树突状细胞分离NK细胞NK细胞免疫磁珠分离法NK细胞E花环形成试验酸性α-醋酸萘酯酶NK细胞活性测定乳酸脱氢酶（LDH）测定法同位素3H-TdR测定法4小时51Cr释放法LAK细胞混合淋巴细胞培养抗体产生细胞的检测 EAC玫瑰花环试验SDS－PAGE蛋白质免疫印记Western-blotting) 第十二章 细胞因子水平测定白细胞介素2(IL-2)的生物学活性测定夹心ELISA人IFN-γ mRNA的RT－PCR检测 第十三章 免疫标记技术 第一节 免疫荧光技术 实验一 硫氰酸荧光素FITC）标记抗体技术 实验二 B淋巴细胞直接免疫荧光抗体检测法 实验三 T淋巴细胞酶－抗酶复合物的制备间接法测定单克隆抗体效价双抗体夹心法ELISA检测抗原斑点酶联免疫吸附试验(DotELISA) 实验六 SPA-ELISA测定伤寒杆菌“O”抗原 实验七 免疫酶组化技术（APAAP法）检测淋巴细胞表面标记DIGFA） 实验五 胶体金免疫层析人绒毛膜促性腺激素IgE 实验三 IRMA测定血清中促甲状腺素 第十四章 超敏反应 实验一 豚鼠过敏性休克试验 实验二 DNFB诱导小鼠迟发型变态反应（耳肿胀法） 附录一 常用试剂和溶液的配制 附录二 免疫器官免疫细胞实 验 室 规 则免疫学实验的目的是巩固和理解基本理论，学习和掌握免疫学实验的基本操作技术为今后的实际工作和科研工作打基础。为，要求同学 1. 课前充分预习，明确实验目的、原理、方法及操作中的注意事项，做到心中有数。 2. 进入实验室穿好白大衣，脱下反叠禁止吸烟、饮食不能用手抚摩头面，以防感染。实验室内静、，不得高声谈笑和随便走动。实验台上只放实验指导、记录本和文具放到指定地点实验，按照实验指导要求进行操作坚持实验的严肃性、严格性、严密性真实记录实验结果，对错误的结果要认真分析，找出原因，得出结论。实验后，写出实验报告及时交给老师批改。 . 实验中如发生割破皮肤及实验材料破损事故，应立即报告教师，进行紧急处理。皮肤破伤可用或消毒。污染桌面、地面和物品可用3来苏儿来消毒。 5. 注意节约实验药品，爱护实验器材，如有实验器材损，报告教师处理。 6. 实验结束用过的有菌器材和放指定地点，用过载片放到消毒缸内，不得弃置上。将实验台收拾整齐，擦净桌面洗手消毒后离去。值日生卫生检查水电、煤气等开关是否关好，安全。 动物实验是免疫学实验中的一种基本实验技术。实验动物的基本操作包括实验动物的编号、抓取固定、取血、注射以及处死方法等技术。 实验一 实验动物的基本操作 实验目的 掌握实验动物的基本操作技术。 实验材料 实验动物，标记染色玻璃取血管实验动物的抓取固定正确的抓取固定动物，是为了不损害动物健康，防止被动物咬伤，保证实验顺利进行。抓取固定动物的方法依实验内容和动物类而定。抓取固定动物前，了解各种动物的一般习性抓取固定时要小心仔细，不能粗暴一小鼠抓取固定小鼠温顺，一般不会咬人，抓取时先用右手抓取鼠尾提起，置于鼠笼或实验台向后拉，在其向前爬行时，用左手拇指和食指抓住小鼠的两耳和颈部皮肤，将鼠体置于左手心中，把后肢拉直，以无名指按住鼠尾，小指按住后腿即可。用手中固定方式左手小指钩起鼠尾，迅速以拇指和食指、中指捏住其耳后颈背部皮肤能进行灌胃、皮下、肌肉和腹腔注射实验操作 手术解剖和心脏采血使动物先取背卧位（必要时先行麻醉），再用大头针将鼠前后肢依次固定在腊板上。尾静脉注射时，可用小鼠尾静脉注射架固定，根据动物大小选择好合适的固定架，打开鼠筒盖，手提鼠尾，让动物头对准鼠筒口并送入筒内，调节鼠筒长短合适后，露出尾巴，固定筒盖即可。二大鼠的抓取固定大鼠比小鼠牙尖性猛，不易用袭击方式抓取，可带上帆布手套抓取避免咬伤。进行灌胃腹腔肌肉皮下注射时，可采用左手固定法用拇指和食指捏住鼠耳，余下三指紧捏鼠背皮肤，置于左掌心中，右手进行实验操作也可伸开左手之虎口，敏捷地从后一把抓住。做手术，事先麻醉或处死，然后用细棉线绳活缚腿，背卧位绑在大鼠固定板上；尾静脉注射时大鼠固定盒即可。