发酵培养基优化方法与策略.pptxVIP

主要内容;1 培养基类型与功能;1 培养基的类型及功能; （2）按状态分类 ; 孢子培养基、种子培养基和发酵培养基 要求：使菌体茁壮生长，产生较多的优质孢子 基本配制要求： ⑴ 营养成分不能太丰富，尤其是有机氮。 ⑵ 合适的水分、 pH和盐浓度 ;生产上常用孢子培养基： 麸皮、大米、小米培养基； 由葡萄糖、蛋白胨、牛肉膏和食盐等配制的琼脂斜面培养基。 大米和小米常用作霉菌孢子培养基，因它们含氮少、疏松、表面积大，是较好的孢子培养基。水分控制在21％－25％。（手捏法）; 种子培养基是供（孢子萌发）、菌体生长和大量繁殖的培养基。 在种子扩培过程中，各级种子培养基的成分往往不一样。 （种子培养基营养相对比较丰富） 最后一级的种子培养基的成分比较接近发酵培养基。;要求 ① 培养基能够满足产物合成的需要。 ② 培养基的原料应因地制宜，价格低廉；质量稳定，资源 丰富，便于运输、仓藏。 ③所选用的培养基应能满足总体工艺的要求，如不应该影响 通气、提取、纯化及废物处理等。 ④杂质少，发酵后所形成的副产物尽可能的少。 ;2.1、碳源;2.1、碳源;2.1.1 糖类;A 淀粉;B 葡萄糖;葡萄糖 glucose DE95-96;C 糖蜜;不少微生物能产生脂肪酶，在脂肪酶的作用下： 油与脂肪 ?甘油+脂肪酸? CO2 + H2O 常用油脂有：豆油、菜油、猪油、鱼油、棉子油等。 脂肪代谢需要更多的氧气，因此发酵时要供给比糖代谢更多的氧，否则脂肪酸的积累及有机酸的积累，会引起pH下降。 油脂类比较粘稠微生物采用脂肪作为碳源时，发酵液易变粘稠。（油脂有消泡作用） ;常用的有机酸有；乳酸、柠檬酸、乙酸等 有机酸有利用常会使pH上升,尤其是有机酸盐氧化时，常伴随着碱性物质的产生，使pH进一步上升。 CH3COONa + O2 ? 2CO2 + H2O + NaOH ;微生物能利用碳氢化合物， 如甲烷、乙烷、烷烃。 各种微生物对各种碳源的利用情况不一样，而且代谢途径也是不一样。 微生物多样性。;2.2 氮源;成分复杂：除了蛋白质、多肽、氨基酸外，还有少量的糖、脂肪、无机盐、维生素等 玉米浆 Corn steep Liquor 玉米淀粉生产过程中的副产品 ①可溶性蛋白、生长因子（生物素）、苯乙酸 ②较多的乳酸 ③硫、磷、微量元素等 ;2.2.2 无机氮源;生理酸性物质： 经微生物生理作用（代谢）后能形成酸性物质的无机氮（化合物）。如， (NH4)2SO4， NH4 Cl。 生理碱性物质：经微生物生理作用（代谢）后能形成碱性物质的无机氮（化合物）。如KNO3, NaNO3。 选择合适的无机氮源注意事宜： 满足菌体生长 稳定和调节发酵过程中的pH;2.3 无机盐及微量元素 ;2.3 无机盐成分一般所用的浓度范围;（1）P，ATP，磷酸化酶，有利用能促进糖代谢。 许多次级代谢过程对磷酸盐浓度的承受限度比生长繁殖过程低，故必须严格控制。 （2）S 硫存在于细胞的蛋白质中， 是含硫氨基酸的组分和某些辅酶的活性基，如辅酶 A (coenzyme A), 谷胱甘肽等。 硫是某些产物如青霉素、头孢菌素等分子的组成部分，在培养基中加入Na2SO4等含硫化合物作硫源。 ;（3） Fe 铁(iron)是细胞色素、细胞色素氧化酶和过氧化氢酶的成分，因此铁是菌体有氧氧化必不可少的元素。 （4）Cl 一些产含氯代谢物如金霉素和灰黄霉素等的发酵中，除天然含有外，通常还需加入0.1%氯化钾。 在啤酒生产中，20－60mg/ml 的氯对酶和酵母有一定的促进作用。 ;（5）K，Na，Ca 钠、钾离子与维持细胞的渗透压有关。钾离子是许多酶的激活剂，能促进糖代谢。 钙是某些酶(如蛋白酶)的激活剂，还参与细胞膜通透性的调节。 培养基中钙盐过多时，容易形成磷酸钙沉淀。。;（6）Zn，Mg，Co，Mn 锌、镁、钴、锰等是某些酶的辅基或激活剂。镁离子还可提高抗生素生产菌对自己所产生抗生素的耐性； 钴既是一些酶的激活剂，又是VB12的组成元素，发酵中加入一定量的钴盐，能使VB12的产量提高数倍。 锰对于羧化作用是必需的，糖代谢中许多酶的活性都与锰有关。;2.4 生长因子、前体、产物促进剂;(2) 前体 precursors;发酵工业中，一些常见前体物质;前体一般都有毒性，浓度过大对菌体的生长不利 如苯乙酸，一般基础料中仅仅添加0.07% 前体添加过多，容易引起挥发和氧化，分解等。 因此，前体在使用过程中，常采用流加方法。;产物促进剂是指那些非细胞生长所必须的营养物，又非前体，但加入后却能提高产量的添加剂。 ; 促进剂提高产量的机制还不完全清楚，其原因