HRP及Hb发光分析法联用FIA在临床检讨中的应用研究.pdfVIP

摘 要 摘 要 本文选用了辣根过氧化物酶g-mP)【=!A及血红蛋白(】胁)分别作为过氧化物酶和 模拟酶的典型，应用了酶联分析技术，采用分子发光法(荧光，化学发光)并联 用流动注射(FIA)，分别研究了在临床中的应用，测定了人体血清中的葡萄糖和 免疫球蛋白G(IgG)的含量，其结果均令人满意： 1、利用血红蛋白具有类似于辣根过氧化物酶的催化活性部位和空间结构， 将其应用到催化过氧化氢．对甲基苯酚的荧光体系中，结合流动注射技术，从而 建立了血红蛋白催化荧光法联用流动注射技术测定人体血清中葡萄糖的新方法， 测定结果令人满意。该法进样频率为23样／d,时，线性范围为3．0X10。5～3．Oxl04 tool·L-1，检出限可至3．8×10西tool-L-1。 2、基于葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化并释放过氧化氢，将其偶合到与鲁米 诺的发光体系中，同时采用牛血红蛋白作为发光体系的催化剂，其发光强度在一 定范围内与过氧化氢的浓度成良好的线性关系，据此建立了一种间接测定人体血 清中葡萄糖含量的新方法。本法联用FIA技术，进样频率为112个／d,时，线性 范围为3．0x10石mol·L1～1．0x10’4mol·L-1，检出限可至1．4xlO—mol·L1。 3、基于非竞争性异相免疫反应的模式，将固定有人体IgG的免疫亲和柱安 装在化学发光检测器前，由于抗原抗体特异性的结合，使得在上流路前的预孵育 过程中，待测定的堙G与HRP标记的羊抗人kG充分反应，而后过量的HRP标 记的羊抗人IgG在载流的带动下进入免疫柱，与固定在免疫柱中的埏G发生反 应，之后加入发光底物，免疫亲和柱上的HRP标记的羊抗人IgG中的酶部分一 —壬珏iP能够催化发光底物产生化学发光，根据发光强度的大小，从而间接测定 待测的人体血清中的IgG的含量。本文利用4-IMP作为发光增强剂，建立了流 动注射非竞争性免疫反应测定人体血清中的IgO的新方法，该实验检测的人体血 y=7027．4．204x109x，检出限为4．6x10母gomUl，相关系数一0．9111。 邮Z 关键词：辣根过氧化物酶(HRP)；血红蛋白(】肪)；免疫球蛋白G(IgG)；血糖； 化学发光；荧光 摘 要 Abstract Thisthesischoosedhorseradish peroxidase(HRP)andhemoglobin(Hb)astypical and the of of mimetic enzyme peroxidase peroxidase．Researchedapplication in theclinic molecular two with emission enzyme analysis spectrometry and flow injection (chemiluminescencefluorescence)by and inhumanselq．1mweredeterminedandtheresultswere glucoseIgG satisfactory． the of fluorescencewas the 1、With catalysthemoglobin，the yieldedby p-cresol