固定相分子臂对溶质保留和蛋白质复性的影响和离子交换色谱复性溶菌酶.pdfVIP

摘 要 液相色谱中，固定相和流动相是两个很重要的因素，其中固定相不仅决定了 色谱保留模式，而且也决定着溶质在色谱中的保留行为，所以研究固定相对溶质 保留行为的影响具有重要意义，本文用计量置换保留理论来研究固定相对溶质保 留及蛋白复性的影响，还研究了弱阳离子交换色谱法对还原变性溶菌酶复性的条 件。 论文包括以下五个部分： 1．文献综述：组分在液相色谱(LC)中保留机理的研究是研究分离和纯化的理论基 础，也一直是色谱研究中的热点，它对实际中的蛋白质分离纯化以及复性都具 有指导意义。本章对色谱中的保留机理及理论、蛋白质液相色谱复性机理及蛋 白折叠动力学理论模型研究进展进行了综述，共包括文献6l篇。 for 2．详细论述了计量置换保留理论(stoiehiometric retention． displacementtheory SDT．R)，以及SDT．R中各参数所表示的物理意义和在疏水色谱中各参数的测定 方法。 3．通过对基质和端基均相同但有和无分子臂的两根疏水柱对7种天然蛋白质和三 种芳香醇同系物的保留及其对SDT—R中的四组线性参数logf(1mol溶质对固定 相的吸附势)、双lmol溶剂化溶质分子被溶剂化吸附剂吸附时，在溶剂化溶质与 溶剂化固定相接触表面的两侧释放出溶剂的摩尔总数)、j(一个与lmol溶荆对固 定相亲合势有关的常数)和log(a(柱相比对数)进行测定的结果进行了比较，考察 分子臂对溶质保留的影响，结果表明，蛋白质分子非极性和极性氨基酸残基与 非极性和极性配基(包括分子臂在内)之间的相互作用，会增加蛋白质与固定相 之间的相互作用力。 4．用两根不同的DIOL疏水柱复性溶菌酶和rhlNF叫，由于亲水性分子臂的影响， 实验测得无分子臂的DIOL．2柱比DIOL-l柱复性溶菌酶的质量回收率和活性回 收率都要高：复性Y一干扰素也是DIOL一2柱的质量回收率和比活较高。 5·，用弱阳离子交换色谱复性还原变性溶菌酶t筛选出最佳的复性溶菌酶时流动相 4小时。在此色谱条件下，还原变性溶菌酶的质量回收率和活性回收率均达到 最高值。对比了两种不同的变性条件一透析和未透析法，对复性溶菌酶的影响， 透析比未透析法复性溶菌酶的质量回收率基本相同，透析比未透析法的活性回 收率高很多，这是由于透析法过程中除去了变性剂后，变性溶菌酶有一部分折 叠形成具有局部空间结构的折叠中间体，只是没有生物活性，在色谱复性时， 这些折叠中间体提高了溶菌酶J下确折叠的几率。 关键词：计量置换理论，间隔臂，DIOL疏水色谱，rhlNF吖，溶菌酶，芳香醇 同系物，复性，离子交换色谱OVCX) ABSTRACT the andmobile in most liquidchromatography(LC)isimportant Stationary phases thestudiesontheeffectof factors thesoluteretention．So stationary effecting phase ontheretentionofsolutehasa InWasusedstoichiometric greatsignificance ontheeffectof forretention(SDT-R)to displacementtheory study stationaryphas