海洋锚参抗癌活性物质分离剖析.pdfVIP

摘要 摘 要 海洋是生命之源，海洋天然产物具有与陆上生物无与伦比的化学结构奇特、 新颖，并具有特异的高活性、高药效的先导化合物。但长期以来，陆生天然产物 一直是天然药物的重要来源。在目前研究的具有新药开发潜力的活性物质中，海 洋天然产物至今才l万多种，远远少于来源于陆生植物的15万多种天然产物， 而海洋面积占地球面积的70％，体积占生物圈的95％，物种数量占地球生物物 种总数的三分之二，目前海洋中90％以上的生物资源都没得到开发利用，所以“向 海洋要药”、从海洋生物中寻找和发现具有新药开发潜力的天然先导化合物成为 新世纪全球药物化学研究的一个重要课题。 癌症历来被人们称作绝症，是严重危害人类健康的重大疾病之一，至今尚 未找到完全根治的治疗方法。寻找比现有药物更高效的抗癌药物成为药物学家一 直以来不懈努力的研究方向。在过去的几十年里，海洋抗癌活性物质的研究在海 洋天然产物研究中一直占据重要地位。就我国来说，我国是一个海洋大国，海域 辽阔，海生资源丰富，自上个世纪八十年代以来，我国海洋药物发展迅速，涉及 海洋中药、现代药物、新老制剂、保健食品及己知重要成分和功效的药用海洋生 物共300余种。但是目前还没有完全完成三期临床实验用于抗癌临床治疗的成品 海洋天然产物药物。 论文选择目前在天然产物药物方面暂无研究的海洋环节动物海洋锚参作为 研究对象，采用化学和生物学多种技术手段相结合，利用化学手段分离纯化其中 的次级代谢产物，结合生物细胞学方法检测其生物细胞活性和毒性。本论文共分 为四个部分，主要内容摘要如下： 第一章首先在第一节中综述了本论文的研究背景，包括海洋药物研究的全 球研究背景、国外海洋抗癌药物研究背景和国内的研究现状。主要综述了目前抗 癌药物研究开发出来的具有抗肿瘤活性的先导化合物代表和主要的活性化合物 化学结构类型。然后在第二节中概述了海洋抗癌药物的研究方法和相关技术。最 后在第三节阐述了本研究工作的目的和意义，就是要从海洋中药海洋锚参中寻找 和发现新的具有潜力的治疗癌症的次级代谢产物。 第二章详细介绍了锚参的生物体，锚参次级代谢产物提取及分离的实验仪 器、药品、方法和过程。自行搭建硅胶色谱分离系统能进行中、低压的快速硅胶 柱层析。对锚参次级代谢产物提取物进行萃取分离，得到乙酸乙酯萃取相部分、 正丁醇萃取相部分和水溶性萃余液。然后以8cm(i．d．)的硅胶柱色谱进行正丁 醇萃取部分的初步分离。将具有药理活性的正丁醇萃取各部分合并且浓缩后，经 复旦大掌硕士掌位匏。文 摘要 历多种直径级别的硅胶柱色谱分离，得到一系列商度纯化的化合物组分，最后以 HPLC进行进一步的纯化。并采用MTT法和磺酰罗丹明B蛋白染色法等生物细 胞活性检测法进行初步的生物活性测试，试验表明所获得的纯化组分具有良好的 抗肿瘤活性。 第三章阐述了来自海洋锚参中新的磺化甾醇Arenicolsterol A的药理学研 究。首先做了Mn弦的生长抑制分析和肿瘤干细胞的集落生长抑制试验，结果 表明化合物对子宫颈癌细胞系Hela和非小型肺癌细胞系NCI．h6有良好的细胞抑 制效果，且通过抑制肿瘤干细胞分裂实验进一步反映出该化合物对Hela细胞的选 择性抑制；然后进行了应用吖啶橙和溴乙啶的双荧光染色、DNA凝胶电泳、流式 细胞仪等方法检测细胞凋亡和对磷酸酯酪氨酸蛋白酶的抑制试验。阐述TASA 抗肿瘤细胞毒性的作用机理是通过作用于药物靶点，导致癌细胞周期(如G2，M 期)阻滞，使难以实现自身修复的癌细胞启动细胞凋亡机制，促成细胞凋亡。 第四章初步研究了海洋锚参中提取出来的抗肿瘤因子SATF，通过 体外能够抑制肿瘤细胞的生长，具有显著的细胞毒性。显微镜下观察到SAlT各 剂量组较对照组癌细胞生长明显受到抑制，细胞形态发生改变，细胞大部分死亡， 分解掉，且呈剂量依赖关系。在荷瘤小鼠抑瘤实验中，SATF能非常明显的抑制 移植肿瘤的生长，SATF高剂量组抑瘤率可达94．53％。显示了SATF进一步开发 的价值。 关键词：海洋锚参，次级代谢产物，抗癌，海洋天然产物 II 复旦大掌硕士掌位论文