外源cu(ⅱ)增强自然cuznsod经多种途径断裂dna的活性.pdf

摘要 铜锌超氧化物歧化酶（CuZnSOD ）最基本的生物功能是作为一种抗氧化酶催化 超氧阴离子歧化为过氧化氢和氧气。然而研究发现 CuZnSOD （包括其突变形式） 参与异常催化氧化反应，导致核酸、蛋白质和细胞膜的损伤。 本文主要采用光谱学方法和酶学方法研究H O 存在下外源Cu(II)与CuZnSOD 2 2 之间的相互作用，以及外源Cu(II)对CuZnSOD 断裂DNA 活性的增强效应。 由Cu(II)滴定 CuZnSOD 过程中紫外可见吸收光谱的变化初步推测过量加入的 外源 Cu(II)与 CuZnSOD 发生了相互作用。CuZnSOD + nCu(II) （n 为 Cu(II)与 CuZnSOD 摩尔浓度的比值）、单独CuZnSOD 和单独Cu(II)断裂pBR322 DNA 的对 比实验结果证实外源Cu(II) 的加入可以增强CuZnSOD 断裂DNA 的活性，且增强效 应随加入 Cu(II) 比例的增大而显著提高。此外，酶活力和稳态动力学的测定结果进 一步证实了外源Cu(II)对CuZnSOD 断裂DNA 活性的增强效应，并且推测增强效应 是Cu(II)和CuZnSOD 协同作用的结果。 本论文还研究了一些因素对CuZnSOD + nCu(II)断裂DNA 反应的的影响。自由 基清除剂和抑制剂对DNA 断裂反应的影响结果暗示参与断裂DNA 的主要活性氧物 种可能是Cu 结合羟自由基、超氧或过氧物种和羟基阴离子。pH 依赖性实验结果表 明断裂 DNA 反应的最适 pH 范围为 pH3.6-5.6 和 pH9.0-10 ，在不同的 pH 区域 CuZnSOD + nCu(II)经多种途径断裂DNA 。 目前广泛接受的一个推测机理是CuZnSOD 与H O 反应生成羟自由基损伤酶自 2 2 身导致Cu(II)释放，而释放出的游离Cu(II)进一步与H O 发生Fenton 反应导致了异 2 2 常催化氧化反应的发生。本论文结果不支持这一结论，实验结果暗示CuZnSOD 可 以为外源 Cu(II)提供一定量的结合位点，而两者之间的协同效应导致了 CuZnSOD 断裂DNA 活性的增强。 关键词：铜锌超氧化物歧化酶，铜离子，DNA 断裂，协同效应 I Abstract It is well known that the primary function of wild type Cu,Zn superoxide dismutase (CuZnSOD) is to catalyze the conversion of the superoxide anion to hydrogen peroxide and dioxygen as an antioxidant enzyme. However, The aberrant copper-mediated oxidation in the enzyme (including its mutation forms) that damages nucleic acids, proteins including itself and cell membrane has attracted an extensive attention in the past decade. The present study examined the hydrogen peroxide-dependent DNA cleavage activity supported with the