一维微流控蛋白质微珠阵列的制备、优化及运用.pdfVIP

一维微流控蛋白质微珠阵列的制备、优化及应用 摘 要 微芯片技术是当今化学与生命科学研究领域发展最快的重要前沿之一．一维 微流控微珠阵列是本研究小组近年来发展起来的一种新型的生物分析芯片，这种 分析芯片在阵列设计的灵活性、液流控制的简便性、试样的低消耗方面具有优异 的性能。在此基础上，针对微珠表面的抗体固定化所面临的问题以及蛋白质分析 的特点和要求，本论文重点研究了微珠表面的抗体修饰方法和蛋白质样品制备方 法，优化了分析条件，并应用于蛋白质的表达分析。研究工作包括三个方面的内 容： 一，微流控通道的内壁改性处理及抗体微珠的制备。本文考察了聚二甲基硅 氧烷(PDMS)微通道内壁对蛋白质的非特异性吸附，并对抗体微珠的制备进行 了研究，制备了基于抗体微珠的一维蛋白质阵列芯片。通过对微通道内壁的改性 处理，PDMs对蛋白质的非特异性吸附得到了有效的抑制。在抗体微珠的制备中， 商品化小鼠单抗试剂中普遍添加的高浓度保护蛋白(常用牛血清白蛋白，即BSA) 严重干扰了抗体的固定化。通过采用离心超滤对超微量抗体试剂进行预处理，大 幅度改善了以BSA为保护蛋白的抗体试剂的抗体固定化效果。此外，本文对利用 蛋白A改善抗体微珠的制各进行了考察和摸索。 二、蛋白质检测条件的控制与优化。包括细