二氢青蒿素对抑制人尿道瘢痕成纤维细胞增殖的实验分析-experimental analysis of dihydroartemisinin on inhibiting proliferation of human urethral scar fibroblasts.docx

摘要摘要目的：尿道损伤及尿道手术后尿道狭窄发生率较高。至今，临床上尚无切实有效的方法治疗尿道狭窄，始终不能摆脱狭窄-扩张/手术-再狭窄的诊治怪圈，给患者带来极大的痛苦。尿道瘢痕组织是尿道创伤修复过程的产物，没有瘢痕就不会有创面的愈合。但是瘢痕一旦过度生长，就会产生尿道狭窄。目前研究发现：狭窄的尿道组织存在典型的瘢痕过度增生改变。但对引起尿道瘢痕过度增生的影响因素不是很明确，因而缺乏有效的措施阻止尿道狭窄的发生。在对皮肤创面瘢痕形成的研究中发现：创面愈合过程中成纤维细胞表现出强烈的增殖能力以及胶原大量分泌、沉积，所以认为成纤维细胞过度表达及胶原的异常分泌是瘢痕产生的根本原因。成纤维细胞是最主要的修复细胞。青蒿素是我国有自主知识产权的药物，我国正对该药进行大力开发和研究。近年发现青蒿素有较好的抑制瘢痕成纤维细胞增殖作用。本课题旨在通过对二氢青蒿素干预后抑制人尿道瘢痕成纤维细胞增殖的研究，以揭示二氢青蒿素抑制人尿道瘢痕成纤维细胞增殖的机制，为人尿道瘢痕防治开辟新路，为临床预防和治疗尿道瘢痕狭窄提供理论依据。方法：.采用组织块贴壁法进行尿道瘢痕成纤维细胞的原代培养，使用含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基，37℃，5%CO2，饱和湿度下培养；描述其生长曲线、分裂指数、形态及波形蛋白表达。2.采用MTT法测定二氢青蒿素对尿道瘢痕成纤维细胞的IC50,采用TUNEL法检测二氢青蒿素作用后尿道瘢痕成纤维细胞凋亡情况，同时采用比色法测定caspase-3、8和9在二氢青蒿素作用后的活化情况，以判断二氢青蒿素作用后是否导致尿道瘢痕成纤维细胞中的caspase活化，并了解是通过哪条通路促进凋亡。结果：1.尿道瘢痕成纤维细胞培养成功率75%（6/8）；50～66天可传第一代，以后每5～10 天可传一代，传代后生长良好；细胞为长梭形，波形蛋白表达阳性。.二氢青蒿素对尿道瘢痕成纤维细胞的IC50为145μmol/L。通过TUNEL法检测到145μmol/L二氢青蒿素作用于尿道瘢痕成纤维细胞后可以见到明显的凋亡细胞。通过比I摘要色法检测到caspase-9和caspase-3活化，而caspase-8没有活化。结论：1.组织块贴必法培养出的尿道瘢痕成纤维细胞可用作体外实验研究，并为进一步实验提供了物质基础。2.一定浓度的二氢青蒿素能够促进尿道瘢痕成纤维细胞凋亡，并通过活化caspase-9后，再活化caspase-3，而启动凋亡程序。关键词尿道瘢痕成纤维细胞二氢青蒿素MTT法TUNEL法细胞凋亡AbstractAbstractObjectives:Theincidenceofurethralstrictureposturethroplastyorurethralinjuryisquitehigh,butthereisstillnoeffectivewaytoclinicallypreventitatpresent.Thepatientswhoarealwaysingreatpainhavebeentrappedintheviciouscircleof urethral stricture and dilatation/surgery.Theurethralscartissueisthebyproductofwoundrepair,itusuallymeans woundhealing.However,oncethescartissueovergrows,urethralstricturehappens.Nowadays,ithasbeendiscoveredthaturethralstricturetissuecontainstypicalhyperplasticscar.Butitisindefinitefortheinfluencingfactorofhyperplasticscarinurethral,sothereisnoeffectivemeasuretopreventurethralstricture.Intheresearchofscarformationofskinscar,wefindovergrowthandcollagenIsecretionoffibroblastduringagglutinationofraw surface,whichwethinkisthereasonofscar.Fibroblastistheoverridingrepaircell.ArtemisininisadrugwithindependentintellectualpropertyinChina,whichwestrongon researchanddevelopment.Artemisininwasfoundhavetheeffectonin