go6976及其同类物的合成分析-synthesis and analysis of go 6976 and its analogues.docx

前言1.1G?6976的简介G?6976是蛋白激酶C（PKC）抑制剂中选择性和药物活性最强的一种[1]。由德国弗莱堡大学KleinschrothJ等人于1993年首次合成出。G?6976自诞生之日起，引起了许多学者的关注，不断有文献报道G?6976新的药理效应，如G?6976能保护受损的神经细胞，同时G?6976还是细胞周期检测点激酶Chk1抑制剂发挥抗肿瘤的作用。加上它还具有抗炎，抗免疫的药理效应，愈发显示G?6976广阔的应用前景。G?6976已经商品化用作PKC的抑制剂，其售价达到2000元/mg；作为Chk1抑制剂，其抑制作用与来自天然的先导化合物UCN-01强度相当，能强烈地废除细胞S和G2期阻滞，特异地在p53突变细胞中加强拓扑异构酶抑制剂SN38的细胞毒性，并且具有低的毒性和高的选择性，与UCN-01不同的是，UCN-01与人血浆α-酸性糖蛋白结合过于紧密，显著延长半衰期（600-1000h），结合率高达88%-98%，大大地降低了它的生物利用度，而G?6976 不与人血浆α-酸性糖蛋白结合，因而生物利用度高，有可能发展成为一种新型的抗肿瘤药物，其研究正在进展过程中。HONN NCH3CN自从1993年德国弗莱堡大学分子细胞生物学研究室KleinschrothJ等人首次粗略地报道了G?6976的合成以后，可能出于商业的原因，没见任何关于G?6976合成的具体过程及合成方法改进的文献报道，国内也没见G?6976的合成文章。在研究中我们发现，按KleinschrothJ的合成方法效率确实很低，甚至不能用于实际的合成，经过合成方法的改进，我们终于完成了G?6976的合成。1.2 蛋白激酶C蛋白激酶C（PKC）是由Nishizaka等人于1977年首次发现的一族磷脂依赖的丝/苏氨酸激酶，PKC在信号转导通路中起重要的作用并参与许多细胞调控的进程，如平滑肌细胞的收缩和细胞的分泌功能。如果阻断了PKC 参与细胞的进程，那么则会引起相应的病理生理变化。PKC至少有12 个亚型，各个亚型功能各异，分布在不同的组织中发挥着各自的生物学功能。PKC由二酰甘油（DAG），钙离子等第二信使激活，一旦激活，PKC磷酸化底物并引发许多细胞内反应，由激素，蛋白因子启动的信号转导，经过分布于不同组织中的PKC的传递，在各种生命现象中发挥着广泛而重要的作用，PKC分子结构分为N-端调节区和C-端催化区，调节区和催化区之间由一条多肽连接，当ATP和底物催化区结合时，多肽充当铰链而使调节区，催化区旋转，但激酶二级结构不受影响，氨基酸序列中有4个保守区（C1-C4），分别与二酰甘油，钙离子，ATP和底物结合，C1,C2区位于调节区，C3,C4位于催化区，这四个保守区分别由5 个可变区(V1-V5)隔开，已发现的PKC 12 个亚型分别是（α,βⅠ,βⅡ,γ,δ,ε,ζ,η,θ,ι,λ,μ），每个亚型有不同的组织分布和功能。据调节区结构，激活条件不同，将PKC分为四大类：钙离子依赖型或传统型（α,βⅠ,βⅡ,γ），非钙离子依赖型（δ,ε,ζ,η,θ），非典型PKC（ι,λ,μ）。[2][3]PKC有着广泛的底物谱，能使代谢途径的关键酶类，离子通道及细胞膜离子泵磷酸化，使与信号转导有关的蛋白质磷酸化，使调控基因表达的转录因子或翻译有关因子，如C-FOS,NF-KB等磷酸化，从而影响内分泌腺和外分泌腺的分泌，神经递质的释放,细胞凋亡，神经元可塑性，心肌收缩，平滑肌张力改变和代谢途径调节，在免疫反应及炎症过程中也起作用，PKC还参与调控细胞的增值与分化，但PKC的过度表达与某些恶变和肿瘤转移有密切关系，如人的前列腺癌细胞中α,δ,ζ,γ,μ的表达明显增加，甲状腺癌中发现α,βⅡ,δ的异常表达，乳腺癌晚期细胞中发现ε表达增高[4]。糖尿病及其并发症的发病过程中蛋白激酶CβⅠ,βⅡ的过度表达起重要作用，PKC的过度激活与糖尿病诱发的微血管病变包括视网膜，肾和神经系统病变密切相关。（PKCβⅡ的过度表达导致心肌病，心脏病，糖尿病心血管综合症，癌症，PKCα的过度表达导致肿瘤的增值和转化，PKCμ会导致肺癌，PKCε促进肿瘤形成等）[4]。因此，寻找PKC抑制剂，特别是发现有亚型特异性的PKC抑制剂引起国内外的关注。1.3G?6976的先导化合物[2][5]从天然产物中发现高生理活性的化合物而后进行修饰和改造仍是目前发现先导化合物和新药合成的重要途径之一，已经有大量关于从植物，微生物以及动物的次生代谢产物中发现PKC抑制剂的报道。星型孢菌素（Staurosporine）是从微生物STREPTOMYCESSP.代谢物中提取得到的吲哚[2,3-a]咔巴唑类生物碱，生物活性研究表明，该化合物能抑制PKC的活性，具有治疗糖尿病并发症和抗肿瘤等多种生物活性，由于其结构新