MTT分析法检测沙立度胺对乳腺癌细胞增殖作用.docVIP

MTT分析法检测沙立度胺对乳腺癌细胞增殖作用 　　【摘要】 目的 观察沙立度胺对乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231增殖的抑制作用。方法 设置溶剂对照及沙立度胺不同浓度组、时间组，采用四甲基偶氮唑蓝 (MTT) 法检测各组细胞存活和生长情况，分析量效关系、时效关系。结果 ① 在10～200 μg/ml浓度范围，沙立度胺对MCF-7和MDA-MB-231细胞增殖均有抑制作用。在药物作用48 h后各组的细胞抑制率均达到高峰，48 h时又以100 μg/ml浓度组抑制率最高。结论 在一定浓度范围，沙立度胺对MCF-7和MDA-MB-231细胞增殖具有抑制作用。 　　【关键词】乳腺肿瘤；细胞系；沙立度胺；MTT 　　 　　Studies on MTT colorimetric assay on the effect of thalidomide on proliferation of breast cancer cell 　　YANG Zhi-yong，Li Shu-qin,JI Yan-xia，et al.Handan Central Hospital,Handan Hebei Province 056001,China 　　 　　【Abstract】 Objective To investigate the effect of thalidomide on proliferation in breast cancer cell lines.Methods Establishing the melting agent checks against and different density，establishing different times at the same time,in order to observes the relation between time and efficacy,the growth rate among these groups was detected by MTT assay.Results The growth rate in these groups had differences,thalidomide can inhibit the proliferation of MCF-7 and MDA-MB-231 among 10-200 μg/ml.The beast inhibitory effect is occurring after thalidomide treated 48 h.100 μg/ml have the beast inhibitory effect after treated 48 h.Conclusion Thalidomide could inhibit the proliferation of breast cancer cells. 　　【Key words】Breast cancer;Cell lines;Thalidomide;MTT 　　 　　通过体外实验观察沙立度胺对乳腺癌细胞增殖的影响，为沙立度胺在肿瘤治疗中的应用提供实验资料。 　　 　　1 材料与方法 　　 　　1．1 细胞株与材料 人乳腺癌细胞由河北医科大学附属第四医院科研中心保存。沙立度胺（±）Thalidomide，Sigma公司产品，批号093K461。溶于二甲基亚砜（DMSO）配制成50 mg/ml浓度储存备用。MTT(四甲基偶氮唑蓝)为华美生物工程公司产品。 　　1．2 细胞培养 将MDA-MB-231、MCF-7细胞置于含有10%胎牛血清的DMEM培养液中(pH 7．2～7．4)，在37℃、5% CO2和饱和湿度条件下培养。细胞呈贴壁生长，待其铺满瓶壁时以0．25% 胰蛋白酶消化传代。取对数生长期的细??进行实验。 　　1．3 MTT法检测细胞增殖反应 将细胞悬液接种于96孔培养板，每孔100 μl 含1×10?4个细胞，置于CO2培养箱中，37℃培养24 h，待细胞附壁后小心吸出各孔内培养液，设置溶剂对照组及4个含沙立度胺（10、50 、100、200 μg/ml）的DMEM培养液组，控制溶剂终浓度2培养箱中，37℃继续培养，培养结束前4 h，各培养孔加入MTT（5 mg/ml）10 μl，4 h后，弃上清液，每孔加入10%DMSO 100 μl，震荡10 min后，用全自动酶标仪检测各孔A570 nm的OD值（OD570 nm），以不加药的阴性对照组A570的OD值均数作为对照，上述实验重复3次。细胞抑制率CI(cytotoxic index,毒性指数)用下式计算： CI(%)=(1-试验组OD值/对照组OD值)×100%。抑制率正值