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α-干扰素体外逆转乳腺癌细胞多药耐药研究 　　116033辽宁大连市第三人民医院肿瘤一科 　　摘 要 目的：探讨干扰素（IFN-α）对人乳腺癌多耐药细胞株MX-1/T的作用及作用机制。方法：采用甲基四氮唑盐（MTT）法检测IFN-α对多药耐药细胞MX-1/T生长的抑制作用。结果：IFN-α浓度0～1400U/ml时对MX-1/T细胞未见明显的抑制作用，当胞因子浓度＞1400U/ml其抑制作用明显加强，并随剂量加大作用加强。结论：IFN-α对MX-1/T细胞的多药耐药性有明显的逆转作用，且在一定浓度范围内有剂量依赖性。 　　关键词 肿瘤 多药耐药性 逆转IFN-a 　　doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2011.11.018 　　资料与方法 　　细胞及培养条件：人乳腺癌细胞系MX-1及其耐药细胞系MX-1/T由中科院细胞库提供，培养于含15%胎牛血清的RPMI 1640培养基（Gibco）中，37℃ 5% CO【sub】2【/sub】培养箱中培养，取对数生长期细胞用于试验。 　　药品与试剂：IFN-α、紫杉醇。 　　TAX对细胞的作用：MX-1细胞和MX-1/T细胞接种于RPMI1640培养液中，加系列浓度的紫杉醇（TAX），使TAX对MX-1及MX-1/T细胞的终浓度0～1.0μg/ml。分别设空白组（培养液组）、对照组（未加药组）、实验组。每组均设3个复孔，每孔100μl接种于96孔培养板，培养48小时，测定细胞活性。实验重复5次，取其均值。 　　IFN-α对MX-1/T细胞的作用：取对数生长期的MX-1/T细胞于96孔培养板中培养，加入IFN-α，使其终浓度0～5000U/ml。对照组为未加药物组，常规培养48小时，测定细胞活性，绘制细胞因子浓度和生长曲线。实验重复5次，取均值。 　　细胞耐药的逆转实验：①实验分组：对照组MX-1/T细胞，不加任何药品；实验组Ⅱ培基含IFN（700U/ml）；实验组Ⅲ培基含IFN-α（1400U/ml）。②逆转试验：MX-1/T细胞接种于96孔培养板，使细胞的终浓度1×10【sup】4【/sup】细胞/ml。分为三组按上述分组给药，常规培养24小时后加入紫杉醇，使TAX终浓度400ng/ml，再培养48小时测定细胞活性。每组均设3个复孔，实验重复5次，取均值。③细胞毒性测定：MTT法：在培养后的细胞，继续培养4小时。吸弃上清后，加入二甲基亚砜100μl/孔，混匀。选择于490nm的波长，在酶联免疫检测仪测定各孔吸光度A值，计算细胞存活率。计算公式：细胞存活率（LCS???（OD实-OD空）/（OD对-OD空）×100%，细胞抑制率1-LCS。细胞耐药倍数耐药细胞IC50/敏感细胞IC50。实验重复5次，取其均值。通过细胞生长抑制率，采用综合计算法，计算出IC50。 　　统计分析方法：数据均采用（X±S）表示；所有数据均用SPSS13.0统计软件处理。 　　 　　 　　结 果 　　TAX对MX-1和MX-1/T细胞的抑制作用：本实验采用MTT法检测0～1.0μg/ml终浓度的TAX在体外对MX-1和MX-1/T细胞的生长作用。结果显示，随TAX浓度的增加，对细胞生长的抑制作用增加，呈现出明显的剂量依赖性关系。 　　以细胞生长抑制率为纵坐标，化疗药物TAX的浓度为横坐标，绘制剂量应曲线，以此求出IC50，以表示细胞对药物的敏感性。在耐药实验中，测得MX-1/T细胞的IC50为6.58±0.11μg/ml，MX-1细胞IC50为0.3±0.017μg/ml。MX-1/T细胞对TAX的耐药倍数约是MX-1细胞的21.9倍，耐药倍数较高，说明本研究所使用的细胞适合作耐药逆转实验研究。 　　IFN-α使用对MX-1/T的细胞毒作用：IFN-α对MX-1/T的作用在细胞因子终浓度0～1400U/ml时，MX-1/T细胞未见明显的生长抑制作用。但当细胞因子增加至终浓度＞1400U/ml时，其制作用明显加强，并随剂量加大作用加强。 　　IFN-α对MX-1/T细胞多药耐药的逆转作用：为更好地了解细胞因子对MX-1/T细胞的逆转效果，最适宜的细胞因子度应是对细胞无影响或伤害最小，同时能最有效地逆转MDR。根据上述结果，将IFN-α终浓度选择1400U/ml作为逆转MDR剂量。其结果显示，IFN-α对MX-1/T细胞均有一定的逆转作用。加入不同浓度IFN-α（700U/ml、1400U/ml）作用于MX-1/T细胞后，其IC50值分别为0.64和0.518，其逆转耐药倍数分别为10.2和12.7。说明IFN-α对耐药细胞MX-1/T有一定的逆转作用。 　　讨 论 　　多药耐药（MDR）是肿瘤化疗失败或缓解后复发的主要原因之一，其作用机制复杂【su